miR-24对糖尿病大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响及机制研究
本文关键词：miR-24对糖尿病大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响及机制研究
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【摘要】：目的:研究过表达miR-24对糖尿病大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响,并探讨其分子机制。方法:将60只SPF级雄性SD大鼠(约170g)喂以高糖高脂饲料4周,继以小剂量链脲佐菌素(STZ,45mg/kg)单次腹腔注射,STZ注射3d/7d后,尾静脉测大鼠空腹血糖,评价糖尿病大鼠模型(空腹血糖≥16.7 mmol/L,造模成功)。诱导建立的糖尿病大鼠随机分为4组(n=12):假手术组(Sham组);颈动脉球囊损伤+生理盐水注射组(PBS组);颈动脉球囊损伤+Ad-Scramble转染组(Ad-Scramble组);颈动脉球囊损伤+Ad-miR-24转染组(Ad-miR-24组)。将重组腺病毒载体或生理盐水在体转染球囊损伤后的大鼠颈总动脉,14天后处死动物,进行相关指标检测。免疫荧光检测腺病毒转染效率,Real-time PCR法测定转染基因miR-24的表达水平;HE评估血管损伤后新生内膜增生程度;免疫组化及Western blot检测损伤血管处增殖核抗原(PCNA)含量,以评价血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖情况;Western blot检测Wnt4相关信号通路Wnt4、Dvl-1、β-catenin、CyclinD1、p21蛋白表达;Real time PCR检测CyclinD1、p21的基因表达水平。结果:(1)STZ注射3d/7d后,大鼠空腹血糖明显升高,且≥16.7 mmol/L。(2)重组腺病毒载体Ad-miR-24转染糖尿病大鼠颈总动脉14天后,免疫荧光检测到GFP的表达,同时Real time PCR检测证实,转染基因miR-24在颈总动脉成功过表达。(3)与Sham组相比,PBS组和Ad-Scramble转染组内膜增生严重,血管腔呈向心或偏心性狭窄,新生内膜平滑肌细胞排列紊乱;Ad-miR-24转染组内膜增生程度明显减轻,管腔狭窄不明显。与PBS组和Ad-Scramble转染组比较,Ad-miR-24转染组颈总动脉新生内膜面积、内膜和中膜面积比(I/M)均显著降低,差异有统计学意义(P0.05),而各组中膜面积无统计学差异(P0.05)。(4)PBS组和Ad-Scramble转染组在球囊损伤后第14d,免疫组化检测可见新生内膜中大量的PCNA阳性表达细胞,而Ad-miR-24转染组中PCNA阳性细胞数较少。与PBS组和Ad-Scramble转染组比较,过表达miR-24可明显抑制新生内膜PCNA阳性表达指数(P0.05)。同时,Western blot检测结果显示PCNA蛋白的表达情况与上述免疫组化结果一致。(5)与Sham组相比,PBS组和Ad-Scramble转染组Wnt4、Dvl-1、β-catenin表达均显著增加(P0.05);而Ad-miR-24转染组中以上Wnt4通路相关的蛋白分子表达量显著降低(P0.05)。PBS组与Ad-Scramble组相比,以上蛋白分子的表达无统计学差异(P0.05)。(6)与Sham组相比,PBS组和Ad-Scramble转染组中促增殖分子CyclinD1基因和蛋白表达水平均显著增加(P0.05)。相反,抗增殖分子p21在基因和蛋白水平上均显著降低(P0.05);与PBS组和Ad-Scramble转染组相比,Ad-miR-24组中CyclinD1的基因和蛋白表达水平均显著降低(P0.05),而p21的基因和蛋白水平上均显著增加(P0.05)。PBS组与Ad-Scramble组相比,CyclinD1、p21基因和蛋白表达均无统计学差异(P0.05)。结论:(1)Ad-miR-24重组腺病毒成功转染糖尿病大鼠血管组织,可显著提高转染基因miR-24表达。(2)miR-24过表达可通过抑制Wnt4/Dvl-1/β-catenin信号通路发挥抗VSMCs增殖,减轻糖尿病大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的增生。
【关键词】：miR-24 糖尿病 颈动脉 球囊损伤 抑制 细胞增殖 内膜增生
【学位授予单位】：三峡大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2
【目录】：
- 内容摘要4-6
- Abstract6-9
- 英文缩略词表9-11
- 引言11-15
- 材料与方法15-23
- 结果23-29
- 第一部分：糖尿病大鼠模型的建立23
- 第二部分：糖尿病大鼠颈动脉球囊损伤模型的建立及腺病毒转染23-24
- 第三部分：腺病毒转染大鼠颈动脉后转染基因mi R-24 的表达24
- 第四部分：HE评估球囊损伤血管后新生内膜的增生程度24-25
- 第五部分：免疫组化及Western blot测定新生内膜中细胞增殖情况25-26
- 第六部分：mi R-24 对Wnt4/Dvl-1/β-catenin信号通路相关分子表达的影响26-27
- 第七部分：mi R-24 对细胞周期相关分子Cyclin D1及p21表达的影响27-29
- 讨论29-31
- 小结31-32
- 不足之处32-33
- 参考文献33-36
- 综述36-41
- 参考文献38-41
- 后记41-42
- 附录42-43
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本文编号：850066
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