糖尿病足感染与自噬相互作用的初步研究

发布时间：2017-09-14 13:34

  本文关键词：糖尿病足感染与自噬相互作用的初步研究

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【摘要】：目的:1:分析糖尿病足感染(Diabetic foot infection,DFI)与非糖尿病但合并足感染患者的临床特点。2:通过与非糖尿病足感染患者创面肉芽组织中细胞的自噬相关蛋白表达情况进行比较,探讨糖尿病(Diabetes mellitus,DM)对肉芽组织总的细胞自噬及巨噬细胞自噬水平的影响;合并铜绿假单胞菌感染时,对两组患者的自噬表达有无影响;并且研究缺血对糖尿病足感染患者细胞自噬的影响。方法:1.收集2014年6月-2015年11月于天津医科大学代谢病医院糖尿病足科住院治疗的90例糖尿病足感染患者(糖尿病组)及天津市武警医院创伤科住院治疗的51例非糖尿病足感染患者(对照组)的临床资料,分析其一般临床特点;根据细菌培养结果及药敏结果,分析两组感染细菌的分布特点,比较铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的检出率及耐药情况,以及多重耐药铜绿假单胞菌(Multi-drug resistant pseudomonas aeruginosa,MDRPA)的检出率。2.两组患者足感染创面清创后深部组织取材,将取得的肉芽组织制作石蜡切片,首先进行HE染色观察比较两组患者肉芽组织病理学的变化;其次,将两组患者的组织切片进行免疫组织化学染色,半定量检测两组患者肉芽组织内细胞自噬标志性蛋白LC3-II(Microtubule-associated protein1 light chain 3-II)及自噬正调节蛋白Beclin-1的表达,比较两组患者肉芽组织中总自噬体的形成情况、两组患者PA感染后细胞自噬的形成情况及缺血对糖尿病足感染患者细胞自噬的影响;最后,将两组患者的组织切片行巨噬细胞标记物CD14及自噬体标志蛋白LC3-II的免疫荧光双染色,定性检测两组患者肉芽组织中巨噬细胞的自噬体水平。结果:1.两组患者临床资料比较,在一般资料方面:两组患者年龄、性别、溃疡面积、体重指数、高血压、冠心病、脑血管病、脂质代谢紊乱方面均无统计学差异(P0.05);但糖尿病组患者糖化血红蛋白值明显高于对照组(P0.05)。在炎症指标方面:两组患者的中性粒细胞百分比及血沉值无明显的统计学差异(P0.05),但是与对照组相比,糖尿病组患者白细胞计数明显降低(P0.05),而C反应蛋白明显升高(P0.05)。糖尿病组患者共检出105株病原体,对照组共检出病原体71株,均以革兰氏阳性菌感染为主(糖尿病组59.0%,对照组57.7%),且两组患者感染革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌的分布无统计学差异(P0.05),两组患者感染的革兰氏阳性菌均以金黄色葡萄球菌为主,革兰氏阴性菌均以铜绿假单胞菌为主,感染细菌的种类无统计学差异(P0.05)。与对照组相比,DM组患者PA检出率无差异,但有升高趋势,PA耐药率及MDRPA检出率明显升高;2.与对照组相比,糖尿病组患者肉芽组织内新生的毛细血管数目及浸润的炎症细胞较少;LC3-II及Beclin-1蛋白阳性着色细胞数量较少,颜色较浅;与对照组PA感染患者相比,糖尿病组PA感染患者肉芽组织中LC3-II及Beclin-1的表达明显减弱;与糖尿病非缺血组患者相比,糖尿病缺血组患者创面肉芽组织LC3-II及Beclin-1表达降低;与对照组相比,糖尿病组患者肉芽组织中巨噬细胞内自噬体标志物LC3-II的表达明显比对照组降低。结论:糖尿病足感染患者多重耐药铜绿假单胞菌的检出率及铜绿假单胞菌的耐药率较高;糖尿病足感染患者创面肉芽组织毛细血管内皮细胞、成纤维细胞及炎症细胞均可发生自噬,但自噬水平尤其是巨噬细胞的自噬水平降低;合并铜绿假单胞菌感染时,糖尿病足感染患者创面肉芽组织内细胞自噬水平也降低;糖尿病足感染合并缺血时,糖尿病足感染患者创面肉芽组织内细胞自噬水平降低更加明显;因此,诱导足创面肉芽组织中的细胞自噬增强可能是治疗糖尿病足感染患者的一种新思路。
【关键词】：糖尿病足 感染 自噬 铜绿假单胞菌 巨噬细胞
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、糖尿病足感染与非糖尿病足感染患者临床特点分析16-25
• 1.1 研究对象和方法16-18
• 1.1.1 研究对象16
• 1.1.2 临床资料的收集16-17
• 1.1.3 诊断标准17-18
• 1.1.4 统计学方法18
• 1.2 结果18-21
• 1.2.1 两组患者一般临床资料比较18-19
• 1.2.2 两组患者感染病原菌的比较19-21
• 1.3 讨论21-24
• 1.4 小结24-25
• 二、糖尿病足感染患者自噬表达的研究25-42
• 2.1 实验材料25-27
• 2.1.1 实验试剂25
• 2.1.2 实验仪器25-26
• 2.1.3 常用试剂的配制26-27
• 2.2 实验方法27-31
• 2.2.1 标本的获取27
• 2.2.2 石蜡标本的制作27-28
• 2.2.3 HE染色观察肉芽组织病理学改变28
• 2.2.4 免疫组织化学染色检测自噬体标志物LC3-II及自噬调节蛋白Beclin-1的表达28-30
• 2.2.5 免疫荧光双染色观察肉芽组织巨噬细胞自噬体标志蛋白LC3-II的表达30
• 2.2.6 统计学方法30-31
• 2.3 实验结果31-34
• 2.3.1 两组患者肉芽组织HE染色结果31
• 2.3.2 自噬体标志物LC3-II及自噬调节蛋白Beclin-1 的免疫组化染色结果.2031-33
• 2.3.3 自噬体标志物LC3-II及巨噬细胞特异性标记物CD14免疫荧光双染色结果33-34
• 2.4 讨论34-41
• 2.4.1 两组患者肉芽组织病理学的比较35-36
• 2.4.2 两组患者肉芽组织自噬发生情况分析36-39
• 2.4.3 两组患者肉芽组织巨噬细胞自噬发生情况分析39-41
• 2.5 小结41-42
• 结论42-43
• 参考文献43-49
• 发表论文和参加科研情况说明49-50
• 综述 2型糖尿病与自噬关系的研究进展50-61
• 综述参考文献55-61
• 致谢61-62
• 个人简历62

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