尿酸、葡萄糖对小鼠成肌细胞Irisin、GLUT4表达的影响及初步机制探讨

发布时间：2017-09-21 00:19

  本文关键词：尿酸、葡萄糖对小鼠成肌细胞Irisin、GLUT4表达的影响及初步机制探讨

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【摘要】：目的:尿酸是嘌呤代谢的最终产物,是体内强大的抗氧化剂,同时在某些因素和条件下,又发挥着促氧化作用,因此其在机体中的作用非常复杂。临床研究显示,尿酸与胰岛素抵抗、肥胖、糖尿病等代谢性疾病密切相关,而目前缺乏相关的直接证据。骨骼肌源性胰岛素抵抗在疾病的发生发展过程中起重要作用,其中Irisin是新近发现的骨骼肌因子,而GLUT4是研究比较充分的葡萄糖转运蛋白,在胰岛素抵抗中起关键作用的因子。本研究通过观察尿酸及葡萄糖刺激小鼠C2C12细胞Irisin、GLUT4表达变化,以初步探讨尿酸对骨骼肌胰岛素抵抗的作用。方法:体外培养小鼠C2C12细胞,根据不同处理因素分为尿酸组和葡萄糖组:尿酸组共6组:0m M,0.1m M,0.2m M,0.3m M,0.4m M,0.6m M;葡萄糖组共3组:5.5m M,15m M,25m M。处理时间分别为0、24小时、48小时。1.应用RT-qPCR技术、Western Blot技术检测不同时间点、不同浓度尿酸刺激C2C12后细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达。2.不同时间点、不同浓度尿酸对C2C12分泌Irisin的影响:应用ELISA技术检测细胞上清液中的Irisin含量。3.应用RT-qPCR技术、Western Blot技术检测不同时间点、不同浓度葡萄糖刺激C2C12后细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达。4.不同时间点、不同浓度葡萄糖对C2C12分泌Irisin的影响:应用ELISA技术检测细胞上清液中的Irisin含量。5.初步机制探讨:应用RT-qPCR技术、Western Blot技术分别检测尿酸、葡萄糖刺激C2C12细胞PGC-1αm RNA和蛋白的表达水平。6.统计学方法:采用SPSS 19.0统计软件分析数据。结果用均数±标准差(`x±s)表示。两组以上比较采用单因素方差分析(ANOVA)。P0.05为差异有统计学意义。结果:1.尿酸组C2C12细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达:尿酸处理C2C12细胞24小时及48小时,Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表达程度均呈先升高后降低的趋向,在0.3m M时达高峰,随后降低,24小时处理组趋势更明显,与正常对照组相比较,差异有统计学意义(均P0.05)。2.尿酸组C2C12分泌Irisin ELISA检测结果:不同浓度尿酸处理小鼠C2C12细胞24小时后,Irisin分泌量先升高后降低,在0.3m M时达高峰,随后逐渐下降,与正常对照组(NC)相比,差异有统计学意义(P0.01);以不同浓度尿酸处理小鼠C2C12细胞48小时后,各处理组Irisin的含量无明显变化;差异无统计学意义(P0.05)。3.尿酸组C2C12细胞内PGC-1αm RNA及蛋白表达:不同浓度尿酸处理C2C12细胞24小时及48小时后,PGC-1αm RNA及蛋白的表达水平均呈先升高后降低的趋势,在0.4m M时达高峰,随后逐渐下降,24小时处理组趋势更明显,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P0.05)。4.葡萄糖组C2C12细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达:不同浓度葡萄糖处理C2C12细胞24小时及48小时后,Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表达水平均呈逐渐降低的趋势,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P0.01)。5.葡萄糖组C2C12分泌Irisin ELISA结果:以不同浓度葡萄糖处理C2C12细胞24小时及48小时后,Irisin的分泌量逐渐降低,与正常对照组(NC)相比,差异有统计学意义(P0.01)。6.葡萄糖组C2C12细胞内PGC1-αm RNA及蛋白的表达:不同浓度葡萄糖处理小鼠C2C12细胞24小时及48小时后,PGC1-αm RNA及蛋白的表达水平均呈逐渐降低的趋势,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P0.01)。结论:1.尿酸对C2C12细胞表达Irisin、GLUT4的影响具有双向性,可能通过PGC1-α来进行调节,但具体机制不详。2.随着葡萄糖浓度升高及作用时间延长,C2C12细胞表达Irisin、GLUT4的抑制作用增强,PGC1-α可能参与了此过程。
【关键词】：尿酸 葡萄糖 Irisin GLUT4 PGC-1α 胰岛素抵抗
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-13
• 前言13-16
• 研究现状、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、对象与方法16-31
• 1.1 研究对象16
• 1.2 主要试剂及配制16-20
• 1.2.1 主要试剂16-17
• 1.2.2 主要试剂配制17-20
• 1.3 主要仪器20-21
• 1.4 实验方法21-30
• 1.4.1 小鼠C2C12细胞培养21-22
• 1.4.2 实验分组22-23
• 1.4.3 ELISA法检测C2C12细胞Irisin含量23-24
• 1.4.4 RT-qPCR检测各组细胞Irisin、GLUT4及PGC-1α mRNA的表达情况24-26
• 1.4.5 Western blot检测各组细胞Irisin、GLUT4及PGC-1α蛋白的表达情况26-30
• 1.5 统计学方法30-31
• 二、结果31-47
• 2.1 C2C12细胞诱导分化成熟图31-32
• 2.2 尿酸刺激C2C12细胞Irisin mRNA的表达32-33
• 2.3 尿酸刺激C2C12细胞Irisin分泌变化33-34
• 2.4 尿酸刺激C2C12细胞Irisin蛋白的表达34-35
• 2.5 尿酸刺激C2C12细胞GLUT4mRNA的表达35-36
• 2.6 尿酸刺激C2C12细胞GLUT4蛋白的表达36-37
• 2.7 尿酸刺激C2C12细胞PGC-1αmRNA的表达37-38
• 2.8 尿酸刺激C2C12细胞PGC-1α蛋白的表达38-40
• 2.9 葡萄糖刺激C2C12细胞IrisinmRNA的表达40-41
• 2.10 葡萄糖刺激C2C12细胞Irisin分泌的变化41
• 2.11 葡萄糖刺激C2C12细胞Irisin蛋白的表达41-43
• 2.12 葡萄糖刺激C2C12细胞GLUT4mRNA的表达43
• 2.13 葡萄糖刺激C2C12细胞GLUT4蛋白的表达43-45
• 2.14 葡萄糖刺激C2C12细胞PGC-1αmRNA的表达45
• 2.15 葡萄糖刺激C2C12细胞PGC-1α蛋白的表达45-47
• 三、讨论47-54
• 3.1 骨骼肌源性因子与胰岛素抵抗47-51
• 3.2 尿酸的复杂作用51
• 3.3 尿酸与胰岛素抵抗51-54
• 结论54-55
• 参考文献55-61
• 发表论文和参加科研情况说明61-62
• 附录62-64
• 综述 尿酸与胰岛素抵抗64-75
• 综述参考文献71-75
• 致谢75-76
• 个人简历76

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本文编号：891264