1、Pdcd4对脂肪来源干细胞的调控及其在饮食诱导肥胖中的作用 2、Pdcd4在氧化低密度脂蛋白和高脂饮食诱导应激颗粒形

发布时间：2017-09-25 00:05

  本文关键词：1、Pdcd4对脂肪来源干细胞的调控及其在饮食诱导肥胖中的作用 2、Pdcd4在氧化低密度脂蛋白和高脂饮食诱导应激颗粒形成中的作用研究

  更多相关文章： Pdcd4 ADSC 干性 米色脂肪细胞 白色脂肪细胞 Pdcd4 应激颗粒 巨噬细胞 氧化低密度脂蛋白 高脂饮食

【摘要】：目的随着人们生活水平的改善以及生活方式的变化,肥胖的发病率逐渐增高,已经发展成严重危害人类健康的疾病。肥胖作为一个全球性疾病,越来越受到人们的重视。肥胖与多种疾病的发病密切相关,可以增加II型糖尿病、心血管疾病和多种癌症等疾病的患病风险。机体能量过剩可以破坏脂肪组织稳态及代谢平衡,导致肥胖及胰岛素抵抗,进而引发上述疾病。脂肪组织在调节机体能量平衡方面起着至关重要的作用。因此,维持脂肪组织稳态和能量代谢平衡是控制肥胖及相关疾病的重要措施。机体内脂肪组织分为白色脂肪组织(White adipose tissues, WAT)和棕色脂肪组织(Brown adipose tissues, BAT)。WAT主要负责能量的贮存和代谢的平衡。当机体能量过剩,而白色脂肪细胞的增殖分化又受抑时,体内过多的脂肪会引起脂肪细胞的肥大,导致WAT尤其是内脏WAT的病理性肥大,进而导致WAT炎症,出现胰岛素抵抗和代谢综合征。相反,BAT主要是以产热方式消耗能量,对于维持机体的体温和能量平衡起重要作用。在寒冷或者高脂饮食的情况下,BAT通过棕色脂肪细胞线粒体内膜上的解耦联蛋白1 (Uncoupling protein 1, UCP1)介导的解耦联作用产生热量,消耗能量,具有抗肥胖作用。近年有研究发现,在适当的刺激条件下,皮下WAT中会出现一种类似棕色脂肪细胞的细胞,被称为棕色样脂肪细胞或者米色脂肪细胞。这类细胞能够表达棕色脂肪细胞特异性的标志物UCP1,其基因表达谱不同于典型的白色脂肪细胞或者棕色脂肪细胞,但作用与棕色脂肪细胞类似,可以通过UCP1的解耦联作用产热并消耗大量能量,起着控制肥胖、糖尿病和代谢性疾病的作用。脂肪来源干细胞(Adipose-derived stem cell, ADSC)是存在于脂肪组织中的间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSC),具有干细胞独有的自我更新能力及多向分化潜能,又称干性。ADSC作为脂肪组织的基质细胞,主要通过平衡其自我更新的能力和分裂分化来维持脂肪组织的稳态。脂肪组织内的ADSC又称前脂肪细胞,适当条件下可增殖分化成成熟的脂肪细胞,参与维持脂肪组织稳态及代谢平衡。ADSC的增殖能力以及其分化为白色或棕色脂肪细胞的潜能直接决定了脂肪组织的代谢稳态以及肥胖的形成与否。因此,寻找控制ADSC增殖与成脂分化方向的基因或者蛋白靶点,也将成为干预治疗肥胖的新策略,为肥胖相关疾病的治疗提供一个全新的思路。程序性细胞死亡基因4 (Programmed cell death 4, Pdcd4)最初被发现是一个在诱导凋亡时上调的基因,现在更多地认为它是一个肿瘤抑制因子,通过影响转录和翻译来抑制基因的表达。近期有研究提出,Pdcd4基因能够参与多种炎症和代谢性疾病。我们前期的研究发现,Pdcd4基因缺失(Pdcd4-/-)小鼠可以抵抗高脂饮食诱导的肥胖形成,其能量消耗显著高于高脂喂养的野生型(Wild type, WT)小鼠,其附睾处WAT的脂肪细胞亦呈现正常大小,未出现病理性肥大。我们发现Pdcd4缺失可通过上调脂质调节因子肝X受体-a (Liver X receptor, LXR-a),参与调节WAT的脂质代谢和稳态。根据前文所述,ADSC是维持脂肪组织稳态的重要基质细胞,那么Pdcd4是否可以通过影响ADSC的功能,进而影响饮食诱导的肥胖,目前尚不明确。为此,我们做了以下研究,分别将来自WT和Pdcd4-/-小鼠的ADSC进行体外培养,检测两种来源的ADSC在干性标志、增殖能力和成脂分化等方面的不同,并进一步探讨其内在机制；同时利用动物体内实验对相关结论进行了验证。方法一、Pdcd4缺失对ADSC干细胞相关标志的影响1. ADSC的提取和培养分离WT和Pdcd4-/-小鼠附睾处脂肪组织,剪碎后加入相应体积的胶原酶,37℃摇床45 min后观察消化情况并终止消化,过滤离心即得到含有ADSC的基质血管成分(Stromal vascular fraction, SVF)。用培养基重悬细胞,接种至6孔板中进行培养扩增。每2-3天换液一次,待细胞融合度达到90%左右时进行传代。2.ADSC表面干细胞相关标志检测通过流式细胞术的方法,分别检测WT和Pdcd4-/- ADSC表面阳性标志CD105. CD90和阴性标志CD11b、CDllc的表达情况。3. Pdcd4缺失对ADSC干性标志的影响分别提取WT和Pdcd4-/- ADSC和SVF中总RNA,检测RNA浓度并进行逆转录,通过Real-time PCR的方法来检测干性标志Nanog、Oct4和Sox2的表达。二、Pdcd4缺失对ADSC自我更新能力的影响1. Pdcd4缺失对ADSC增殖能力的影响体外实验：首先通过CCK-8实验检测WT和Pdcd4-/- ADSC在培养12 h和24 h后细胞增殖能力的不同,通过克隆形成实验检测其克隆形成能力的差异。接下来又通过EdU掺入和PI染色检测细胞的增殖及周期变化。体内实验：将EdU通过腹腔注射到WT和Pdcd4-/-小鼠体内,24 h后取附睾处脂肪组织,固定包埋切片并进行染色,观察脂肪组织中ADSC的增殖情况。2. Pdcd4缺失对ADSC增殖相关信号通路的影响取处于对数生长期的WT和Pdcd4-/- ADSC,用Western-blot的方法检测p-AKT和细胞周期蛋白cyclinD1的表达情况。为了进一步验证AKT通路在ADSC增殖过程中的影响,我们在细胞培养过程中加入2μM AKT抑制剂MK2206,用Western-blot和EdU掺入的方法检测加入抑制剂之后细胞增殖的变化。三、Pdcd4缺失对ADSC成脂分化能力的影响1. Pdcd4缺失对ADSC成脂分化的影响按照C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞成脂诱导分化培养基产品说明书分别对WT和Pdcd4-/- ADSC进行成脂诱导。用Real-time PCR的方法分别检测在诱导0、4、8、12天白色脂肪细胞标志C/EBPa-/- PPAR-γ-/- adiponectin和aP2的mRNA表达水平。在诱导18天后对细胞进行油红O染色,观察脂滴的多少和大小,用紫外分光光度计检测脂质形成的多少。并用Real-time PCR和组化的方法检测12天后米色脂肪细胞标志UCP1的表达情况。2. Pdcd4缺失对高脂环境下WAT中ADSC分化的影响(1)建立饮食诱导肥胖模型8周龄WT和Pdcd4-/-小鼠用于实验模型建立,分别给予高脂饮食(High fat diet, HFD,含有15%脂肪和0.25%胆固醇),或常规饮食(Normal diet, ND)喂养24周。(2)米色脂肪细胞标志的检测取高脂和常规喂养24周的WT和Pdcd4-/-小鼠附睾处白色脂肪组织的蛋白和总RNA,分别用Western-blot和Real-time PCR的方法检测UCP1的表达情况,并对脂肪组织切片进行免疫荧光染色检测UCP1的表达。3. Pdcd4缺失对ADSC乳酸产生的影响分别收集WT和Pdcd4/-/ ADSC诱导之前和诱导第12天的细胞上清,用乳酸检测试剂盒检测上清中乳酸的含量。一、结果Pdcd4缺失增强LDSC干细胞相美标志的表达1. Pdcd4缺失增强SC表面标志的表达检测WT和Pdcd4-/- ADSC在体外培养扩增后干细胞相关表型的表达。对两种不同来源的ADSC进行拍照观察,两种细胞在形态上并没有明显的差异。WT和Pdcd4-/- ADSC都高表达干细胞相关的表面标志CD105和CD90,不表达或者低表达CD11b和CD11c。不同的是,与WT ADSC相比,Pdcd4-/- ADSC表面CD105和CD90的表达水平明显增高。2. Pdcd4缺失增强ADSC干性相关标志的表达接下来,我们检测了干细胞干性相关基因Nanog、Oct4和Sox2在mRNA水平的变化。与WTADSC相比,Pdcd4-/- ADSC中Nanog-/- Oct4在mRNA水平的表达明显上调,而Sox2变化不是很明显。为了排除体外扩增培养对ADSC的可能影响,我们又检测了ND小鼠SVF中干性相关基因的表达。结果显示,Pdcd4-/-小鼠SVF中Nanog-/- Oct4和Sox2的表达在mRNA水平的表达都较WT小鼠SVF中显著增高。二、Pdcd4缺失增强ADSC的自我更新能力1. Pdcd4缺失促进ADSC由G1期进入到S期,进而促进ADSC的增殖从CCK-8方法绘制的生长曲线和克隆形成实验的结果都可以看出Pdcd4缺失能够促进ADSC的增殖。而EdU染色的结果提示Pdcd4-/- AADSC有较多的细胞处于细胞周期的S期,流式细胞术检测细胞周期的结果显示与WT ADSC相比,Pdcd4-/- ADSC处于S期的细胞比例增大,而处于G1期的细胞数明显减少。WAT石蜡切片的EdU染色结果显示,Pdcd4-/- WAT中有较多的细胞处于增殖期。提示Pdcd4缺失可以增强小鼠WAT中ADSC的干性。以上结果表明Pdcd4缺失能够促进ADSC由G1期进入到S期,进而促进ADSC的增殖。2. Pdcd4缺失引起的ADSC周期变化依赖于AKT信号通路的激活利用Western-blot的方法检测WT和Pdcd4-/- ADSC中AKT的活化状态,结果显示与WT ADSC相比,Pdcd4-/- ADSC中p-AKT的水平明显上调,cyclinD1表达也显著增强。加入AKT抑制剂MK2206后,WT ADSC的细胞增殖受到了明显的抑制,EdU阳性的细胞数也明显降低,但cyclinD1的变化不大。然而在Pdcd4-/- ADSC中,AKT的抑制伴随着cyclinD1表达的显著下调,EdU阳性的细胞数也大大降低。以上结果表明Pdcd4缺失引起的ADSC由G1期向S期的转换依赖于AKT信号通路的激活。三、Pdcd4缺失促进ADSC由白色脂肪细胞转分化为米色脂肪细胞1. Pdcd4缺失体外促进ADSC由白色脂肪细胞转分化为米色脂肪细胞检测诱导0、4、8和12天的WT和Pdcd4-/- ADSC中白色脂肪细胞相关标志C/EBPα adiponectin、PPAR-γ和aP2的nRNA表达水平,发现在诱导过程中这些基因的表达都快速上调。诱导12天以后,Pdcd4-/- ADSC中这些基因的mRNA表达水平明显低于WT ADSC,油红O染色结果发现Pdcd4-/- ADSC诱导形成脂质的能力较低。而Pdcd4-/-脂肪细胞中UCP1的mRNA表达水平明显高于WT脂肪细胞,细胞UCP1的组化染色也得到了相同的结论。以上实验结果表明,Pdcd4缺失在一定程度上能够抑制ADSC向白色脂肪细胞的分化,转而促进ADSC分化为表达UCP1的米色脂肪细胞。2. Pdcd4缺失促进高脂喂养的小鼠WAT中米色脂肪细胞的形成我们分别提取了ND和HFD喂养的WT和Pdcd4-/-小鼠附睾处WAT中的蛋白和总RNA,并检测在蛋白和mRNA水平UCP1的表达。ND WAT中UCP1的表达量很低,但在高脂以后,Pdcd4-/- WAT中UCP1的表达明显增强,而WT WAT中并没有太大的变化。与肥胖的WT小鼠相比,HFD Pdcd4-/- WAT中UCP1的表达量更高,与WAT的UCP1免疫荧光染色的结果是一致的。以上结果表明,Pdcd4缺失能够促进高脂饮食喂养的小鼠白色脂肪组织中米色脂肪细胞的形成。3. Pdcd4缺失促进ADSC产生乳酸乳酸含量检测结果显示,Pdcd4-/- ADSC上清中乳酸的含量显著高于WTADSC上清。在诱导12天时,Pdcd4-/-脂肪细胞上清中乳酸的含量也是显著增高的,而此时细胞中UCP1的表达也是上调的,提示乳酸在这一过程中有推动作用。结论1.Pdcd4缺失增强ADSC的干性。2. Pdcd4缺失通过激活AKT通路促进ADSC的G1/S期转换,进而促进其增殖。3. Pdcd4缺失促进ADSC由白色脂肪细胞转分化为米色脂肪细胞。目的应激颗粒(stress granule,SG)是真核细胞在受到热休克、病毒感染、氧化应激或者内质网应激等刺激下,细胞质内mRNA和多种核糖核蛋白聚集形成的颗粒状复合体。为了应对环境中的有害刺激,细胞中的蛋白翻译迅速停滞,导致多聚核糖体的快速解离,未翻译的mRNA、多种翻译起始因子和核糖核蛋白等重新组装,形成SG。T细胞内抗原(T-cell-restricted intracellular antigen-1, TIA-1)、脆性X智力迟钝相关受体(Fragile X mental retardation-relate protein 1, FXR1)、真核细胞起始因子4A (Eukaryotic-initiating factors 4A, eIF4A)和eIF4B常作为SG形成的标志。当环境中的压力消失以后,聚集形成的SG就会重新解聚,蛋白翻译继续进行。迄今为止,SG已经被发现存在于多种类型的疾病中,包括病毒感染、炎症性疾病、癌症和多种神经退行性疾病。程序性细胞死亡基因4 (Programmed cell death 4, Pdcd4)作为一种翻译抑制因子,可以通过其MA3结构域与翻译起始因子eIF4A结合并抑制其解旋酶活性,从而抑制帽依赖的蛋白翻译作用。基于其蛋白翻译抑制作用,Pdcd4可以抑制肿瘤细胞的生长,进而抑制肿瘤的致瘤性转化和进展。随着研究的深入,Pdcd4的抗炎作用逐渐被大家认识。近期,我们的研究证实Pdcd4可以促进饮食诱导肥胖及相关脂肪组织炎症。Pdcd4缺失(Pdcd4-/-)小鼠可以抵抗高脂饮食诱导的脂肪组织内质网应激和肝组织氧化应激,提示Pdcd4可以参与高脂饮食诱导的内质网应激和氧化应激。但是Pdcd4在应激过程中的作用尚未确定,是否与应激状态下SG形成有潜在的联系尚不可知。氧化应激是体内氧化作用和抗氧化作用失衡的一种状态。氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)可以通过促进和增加活性氧的生成进而增强巨噬细胞和许多其他细胞中的氧化应激,可作为氧化应激的诱导条件。于是,在本研究中,我们检测了高脂饮食条件下Pdcd4对巨噬细胞和肝组织中SG形成的影响,并进一步用ox-LDL刺激巨噬细胞、HeLa细胞和HepG2细胞,观察在体外诱导条件下Pdcd4对SG形成的影响,并探讨其内在机制。方法1.高脂小鼠巨噬细胞和肝组织中SG的检测首先用野生型(Wild type,WT)和Pdcd4-/-雄性小鼠建立饮食诱导肥胖模型,取高脂饮食WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬细胞和肝组织的石蜡切片进行TIA-1的免疫荧光染色,观察TIA-1+ SG的形成。2.Pdcd4在SG形成中的作用分别提取WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬细胞,设置ox-LDL刺激组和对照组,进行TIA-1的免疫荧光染色,观察SG的形成情况,并对含有SG的细胞数进行统计学分析。3.Pdcd4与SG的定位关系Ox-LDL分别刺激WT巨噬细胞和转染了pEGFP-C1-Pdcd4质粒的HeLa细胞,24 h后进行SG特异性标志TIA-1、FXR1和eIF4A的免疫荧光染色,观察Pdcd4与SG标志的定位关系。4.Pdcd4通过RNA结合区域参与SG形成已证实Pdcd4基因序列中有两个RNA结合区域,分别是RBM1和RBM2基序。我们在pEGFP-C1-Pdcd4(Pdcd4-WT)质粒的基础上,分别构建RBM1缺失(Pdcd4-D1).RBM2缺失(Pdcd4-D2)和这两个区域共同缺失(Pdcd4-D1+2)的截短体,并分别转染入HepG2细胞,然后ox-LDL刺激并进行SG特异性标志TIA-1的免疫荧光染色,观察SG的形成情况,并对细胞中的SG数进行统计学分析。5.Pdcd4调节SG形成1)HeLa细胞分别转染pEGFP-C1质粒和pEGFP-C1-Pdcd4质粒,ox-LDL刺激24 h后提取蛋白,并设置对照组,用Western-blot的方法检测p-eIF2a的表达情况。2)分别提取WT和Pdcd4-/-巨噬细胞,ox-LDL刺激24 h后提取蛋白,并设置对照组,用Western-blot的方法检测p-AKT和p-eIF2a的表达情况。3)提取Pdcd4-/-巨噬细胞,过夜后加入2μM AKT抑制剂MK2206,6h后加入ox-LDL培养24 h,收集蛋白,用Western-blot的方法检测p-AKT和p-eIF2a的表达情况,并用免疫荧光染色的方法观察SG的变化。4)分别提取高脂喂养WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬细胞的蛋白,用Western-blot的方法检测p-AKT和p-eIF2a的表达情况。结果1.高脂喂养Pdcd4-/-小鼠中巨噬细胞和肝组织中的SG减少首先,我们以TIA-1作为应激颗粒的标志,检测WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬细胞和肝组织中SG的形成。结果显示,WT巨噬细胞中可以明显得观察到TIA-1+ SG,而Pdcd4-/-巨噬细胞中则很少,肝组织中也出现类似的现象。这些数据表明,SG能够参与高脂饮食诱导的应激反应,更重要的是揭示在高脂饮食的刺激下,Pdcd4是SG形成的一个关键因素。2. Pdcd4缺失能够降低ox-LDL刺激的巨噬细胞中TIA-1+ SG的形成我们用ox-LDL刺激分别刺激WT和Pdcd4-/-巨噬细胞,结果显示WT巨噬细胞中含TIA-1+ SG的细胞数显著升高,而Pdcd4-/-巨噬细胞中含TIA-1+ SG的细胞数变化并不明显,只有很少的细胞中可观察到SG。与WT巨噬细胞相比,Pdcd4-/-巨噬细胞中含有TIA-1+ SG的细胞数明显下降。以上结果说明,Pdcd4缺失能够降低ox-LDL刺激的巨噬细胞中TIA-1+ SG形成。3. Ox-LDL刺激的巨噬细胞中Pdcd4与SG特异性标志的共定位免疫荧光的结果显示,在ox-LDL刺激的WT巨噬细胞中Pdcd4与SG特异性标志TIA-1、FXR1和eIF4A的表达具有良好的共定位关系,说明ox-LDL可以诱导巨噬细胞中SG的产生,Pdcd4可能是SG的一个重要组成部分。4. Ox-LDL刺激的HeLa细胞中外源性Pdcd4与SG特异性标志的共定位免疫荧光的结果显示,过表达Pdcd4-GFP融合蛋白的HeLa细胞(转染pEGFP-C1-Pdcd4质粒)经ox-LDL刺激后有明显SG的形成,且外源性Pdcd4 (GFP')与SG标志TIA-1、FXR1和eIF4A的表达都具有共定位的关系,与巨噬细胞中观察到的现象是一致的。因此提示ox-LDL刺激可以促进外源性Pdcd4参与SG的形成。5.Pdcd4通过RNA结合区参与SG的形成在HepG2细胞中转染pEGFP-C1-Pdcd4质粒(Pdcd4-WT)并用ox-LDL刺激之后,可以看到大量GFP+ TIA-1+ SG的形成,但转染Pdcd4-D2和Pdcd4-D1+2的细胞,GFP+ TIA-1+ SG的形成显著减少。而在转染Pdcd4-D1的细胞中,GFP+ TIA-1+ SG的形成与转染pEGFP-C1-Pdcd4质粒相比并没有明显的变化。以上结果表明,Pdcd4主要通过RBM2结构域参与ox-LDL诱导的SG形成。6.Pdcd4通过AKT-eIF2a通路调节SG的形成首先,我们证实了ox-LDL刺激可以激活eIF2α信号通路并促进SG的形成。接下来我们发现与WT巨噬细胞相比,ox-LDL刺激之后,Pdcd4-/-巨噬细胞中p-eIF2a的表达下调伴有p-AKT的明显上调,提示Pdcd4-/-巨噬细胞中p-eIF2α的下调可能源于AKT信号通路的激活。当抑制AKT通路的活化之后,p-eIF2α的表达明显上调,SG的形成也随之增多。此外,与高脂喂养的WT小鼠相比,来自高脂喂养Pded4-/-小鼠的腹腔巨噬细胞亦发现明显的p-eIF2α下调伴p-AKT上调。以上这些结果表明ox-LDL和高脂饮食诱导的SG形成依赖于eIF2α的磷酸化,这一过程在一定程度上是受AKT通路调节的。结论1.Ox-LDL和高脂饮食可以诱导SG的产生。2.Pdcd4通过RNA结合区参与SG的形成。3.Pdcd4通过AKT-eIF2α通路调节SG的形成。
【关键词】：Pdcd4 ADSC 干性 米色脂肪细胞 白色脂肪细胞 Pdcd4 应激颗粒 巨噬细胞 氧化低密度脂蛋白 高脂饮食
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.2
【目录】：

• 第一部分 Pdcd4对脂肪来源干细胞的调控及其在饮食诱导肥胖中的作用9-63
• 中文摘要9-15
• 英文摘要15-22
• 符号说明22-23
• 前言23-27
• 材料27-30
• 方法30-39
• 1. Pdcd4缺失对ADSC干细胞相关标志的影响30-32
• 2. Pdcd4缺失对ADSC自我更新能力的影响32-35
• 3. Pdcd4缺失对ADSC成脂分化能力的影响35-38
• 4.统计学分析38-39
• 结果39-43
• 1. Pdcd4缺失增强ADSC干细胞相关标志的表达39
• 1.1 Pdcd4缺失增强ADSC表面标志的表达39
• 1.2 Pdcd4缺失增强ADSC干性相关标志的表达39
• 2. Pdcd4缺失增强ADSC的自我更新能力39-41
• 2.1 Pdcd4缺失促进ADSC由G1期进入到S期,进而促进ADSC的增殖39-40
• 2.2 Pdcd4缺失引起的ADSC周期变化依赖于AKT信号通路的激活40-41
• 3. Pdcd4缺失促进ADSC由白色脂肪细胞转分化为米色脂肪细胞41-43
• 3.1 Pdcd4缺失体外促进ADSC由白色脂肪细胞转分化为米色脂肪细胞41
• 3.2 Pdcd4缺失促进高脂喂养的小鼠WAT中米色脂肪细胞的形成41-42
• 3.3 Pdcd4缺失促进ADSC产生乳酸42-43
• 讨论43-46
• 小结46-47
• 附表47-48
• 附图48-59
• 参考文献59-63
• 第二部分 Pdcd4在氧化低密度脂蛋白和高脂饮食诱导应激颗粒形成中的作用研究63-98
• 中文摘要63-67
• 英文摘要67-72
• 符号说明72-73
• 前言73-75
• 材料75-76
• 方法76-81
• 1. 高脂小鼠巨噬细胞和肝组织中SG的检测76
• 2. Pdcd4在SG形成中的作用76-77
• 3. Pdcd4与SG的定位关系77
• 4. Pdcd4通过RNA结合区域参与SG形成77-80
• 5. Pdcd4调节SG形成80
• 6. 统计学分析80-81
• 结果81-84
• 1. 高脂喂养Pdcd4~(-/-)小鼠中巨噬细胞和肝组织中的SG减少81
• 2. Pdcd4缺失能够降低ox-LDL刺激的巨噬细胞中TIA-1~+SG的形成81
• 3. Ox-LDL刺激的巨噬细胞中Pdcd4与SG特异性标志的共定位81
• 4. Ox-LDL刺激的HeLa细胞中外源性Pdcd4与SG特异性标志的共定位81-82
• 5. Pdcd4通过RNA结合区参与SG的形成82
• 6. Pdcd4通过AKT-eIF2α通路调节SG的形成82-84
• 讨论84-86
• 小结86-87
• 附图87-95
• 参考文献95-98
• 致谢98-99
• 发表文章99
• 参与课题99-100
• 学术活动100
• 获奖情况100-101
• 学位论文评阅及答辩情况表101

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本文编号：914216