AGEs对大鼠BMSCs成骨分化过程中LRP5、Col-ImRNA表达的影响

发布时间：2017-10-01 14:02

  本文关键词：AGEs对大鼠BMSCs成骨分化过程中LRP5、Col-ImRNA表达的影响

  更多相关文章： AGEs BMSCs 成骨分化 I型胶原蛋白 LRP5

【摘要】：目的:观察AGEs对大鼠BMSCs增殖、分化的影响,观察AGEs是否抑制Wnt/β-catenin信号通路中LRP5基因表达,进一步探索骨质疏松症的发病机理。方法:1.大鼠BMSCs的提取、培养及鉴定。2.AGEs对BMSCs增殖的影响:以大鼠的BMSCs作为体外试验模型,不同浓度AGEs(0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml)和相应浓度的BSA作用于BMSCs72小时,采用CCK-8法检测BMSCs的增殖情况;观察0.2mg/ml AGEs和BSA分别作用于细胞24小时、48小时、72小时BMSCs增殖情况。3.AGEs对BMSCs矿化的影响:分组:(1)对照组(0.2mg/ml BSA+成骨诱导液)(2)实验组(0.2mg/ml AGEs+成骨诱导液)方法:第3代BMSCs达到80%-90%融合时,0.25%胰酶消化,配制1×104个/ml细胞混悬液。接种于6孔板中孵育。24小时后分别加入2mlBSA和AGEs液体。18天后行茜素红染色。4.观察AGEs对LRP5m RNA、Col-ImRNA表达的影响:分组:(1)成骨诱导液;(2)0.2mg/mlBSA+成骨诱导液;(3)0.2mg/mlAGEs+成骨诱导液;(4)50ug/ml抗RAGE中和性抗体+0.2mg/mlAGEs+成骨诱导液;方法:上述浓度的药物干预BMSCs 7天,RT-PCR技术测定LRP5、Col-I mRNA的表达。5.统计学分析:所有数据均采用数据软件包SPSS20.0进行处理。计量资料以sx±表示,组内比较采用配对t检验。多组间比较采用单因素方差分析,两两之间多重比较采用LSD检验。P0.05表示差异有统计学意义。结果:1.原代BMSCs集落样贴壁生长,镜下观察长梭形、巢状,传代后细胞变短、多角。第三代BMSCs成骨分化诱导后进行茜素红染色,在显微镜下观察有钙化结节形成。流式细胞仪进行BMSCs表明标志物鉴定,第三代BMSCs特异性表面标志物CD44、CD90的阳性表达率分别为96.07%、99.34%,CD34的阴性表达率为0.19%。2.在BMSCs培养基中分别加入不同浓度的AGEs(0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml),72小时后,AGEs组较对照组BMSCs光密度(OD)值都有所降低,且在0.05mg/ml~0.2mg/ml范围内,差异有统计学意义(P0.05)。观察0.2mg/ml AGEs作用细胞24小时、48小时、72小时BMSCs OD值的变化,发现AGEs组较BSA组在48小时、72小时BMSCs的增殖明显抑制,差别有统计学意义(P0.05)。AGEs对于BMSCs的抑制率随着浓度的增大与时间的延长逐渐增高。3.AGEs组作用于BMSCs18天后较对照组矿化结节的形成数量明显减少。4.AGEs组作用于BMSCs7天后较对照组Col-I mRNA、LRP5 mRNA表达量减少,组间对照差别有统计学意义(P0.01)。给予抗RAGE中和性抗体后行AGEs干预,发现Col-I mRNA、LRP5 mRNA表达量较对照组无明显变化,差别无统计学意义(P0.05)。结论:1.AGEs呈浓度与时间依赖性抑制大鼠BMSCs的增值。2.AGEs与受体RAGE结合后,抑制大鼠BMSCs成骨分化。3.AGEs抑制了Wnt信号通路中LRP5基因表达。
【关键词】：AGEs BMSCs 成骨分化 I型胶原蛋白 LRP5
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R580
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-18
• 1.1 实验动物13
• 1.2 主要试剂13
• 1.3 主要仪器13-14
• 1.4 试剂的配制14-15
• 1.5 实验方法15-18
• 2 结果18-21
• 2.1 BMSCs形态观察及鉴定18-19
• 2.2 AGEs对BMSCs增殖的影响19
• 2.3 AGEs对BMSCs成骨分化过程中矿化的影响19-20
• 2.4 AGEs对Col-ImRNA、LRP5 mRNA表达的影响20-21
• 3 讨论21-24
• 3.1 AGEs对BMSCs增殖的影响21
• 3.2 AGEs对BMSCs成骨分化的影响21-22
• 3.3 AGEs对Wnt/β-catenin信号通路的影响22-24
• 4 结论24-25
• 参考文献25-29
• 综述29-36
• 参考文献33-36
• 致谢36-37
• 在学期间研究成果37-38
• 个人简历38

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本文编号：953819