miR146a及TRAF6、IRAK1基因表达与原发性干燥综合症并肺间质病变的相关性分析

发布时间：2017-10-08 05:30

  本文关键词：miR146a及TRAF6、IRAK1基因表达与原发性干燥综合症并肺间质病变的相关性分析

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【摘要】：目的：原发性干燥综合征除累及外分泌腺体外尚可因腺体外其他器官的受累而出现多系统损害的症状。其中肺间质病变是其死亡的主要原因,故pSS-ILD已成为临床及免疫学研究的热点,我们在前期的研究中已经发现pSS-ILD发病与TNF-α、TGF-β1和MMP9过度释放导致肺泡炎症密切相关,而TNF-α、TGF-β1和MMP9大量分泌与NF-κB信号通路的激活,继而通过TLR结合MyD88引起IRAK1磷酸化,之后激活TRAF6,形成MyD88-IRAK1-TRAF6信号复合体来完成。因此,我们提出假设：PSS-ILD发病与miR-146a及其靶基因IRAK1、TRAF6的表达相关。为证实这一假说,我们将评估pSS-ILD患者外周血单个核细胞中miR-146a及其靶基因IRAK1、TRAF6的表达情况,同时与健康对照者pSS患者比较,为pSS-ILD患者寻求新的治疗靶点。方法：1.筛选并收集原发性干燥综合征并肺间质病变病例并签署知情同意书,予免疫抑制剂序贯治疗,采集外周血备检。2.分离各组外周血单个核细胞(PBMC)提取总RNA,通过FQ-PCR、RT-PCR检测miR-146a/靶基因TRAF6、IRAK1的表达,统计分析各组结果是否具有统计学意义。3.ELISA检测TNF-α、IL-2、IL-1β,分析各组细胞因子在发病中的作用及其与miR-146a是否具有相关性。4.检测收集各组患者临床指标ESR、CRP、IgA、IgM、IgG。统计学分析其与miR146a, IRAK-1, TRAF-6之间是否存在线性关系。5.通过统计学分析,推论miR146a/ IRAK-1、TRAF-6是原发性干燥综合征并肺间质病变潜在治疗靶点。结果：①研究结果表明miR-146a在患者组(pSS和pSS-ILD)其相对表达量明显低于健康组(n=10,P0.05),在pSS患者组其相对表达量明显低于pSS-ILD患者组(n=1 0,P0.05)。② IRAK1其相对表达量在pSS组明显低于健康对照组(n=10,P0.05); pSS-ILD组明显高于健康对照组(n=10,P0.05)；pSS组明显低于pSS-ILD组(n=10,P0.05)。③ TRAF6的相对表达量在患病组(pSS和pSS-ILD)明显低于健康对照组(n=1O,P0.05)；而pSS组和pSS-ILD组无明显差异。④ TNF-α在健康对照组明显低于患病组(pSS和pSS-ILD), (n=10,P0.05);在pSS组和pSS-ILD组无明显区别。⑤ IL-1β在健康对照组的相对表达量明显低于患病组(pSS和pSS-ILD), (n=10,P 0.05);且在pSS组低pSS-ILD组(n=1O,P0.05)。⑥IL-2在健康对照组的相对表达量明显低于患病组(pSS和pSS-ILD) (n=10,P 0.05);且在pSS组低组pSS-ILD组(n=10,P0.05)。⑦ MiR-146a对IRAK-1、TRAF-6及其下游炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-2起负调节作用。miR-146a负调节IRAK-1(r=-0.987,P 0.01),miR-146a负调节TRAF-6(r=-0.998,P 0.01)。 miR-146a负调节TNF-a(r=-1.000,P 0.01), miR-146a负调节IL-1β (r=-1.000,P 0.01), miR-146a负调节IL-2 (r=-0.991,P 0.01)。⑧ Spearman线性关系分析显示miR146a、IRAK-1、TRAF-6与临床指标、CRP、IgA、 IgG无明显相关性。结论：研究结果表明miR-146a在pSS-ILD疾病发生发展中起到关键作用,且可能与疾病的严重程度相关。其表达水平可以作为预测pSS-ILD发生及严重程度的生物检验学指标,未来也可能成为治疗pSS-ILD的生物学靶点。
【关键词】：原发性干燥综合症 肺间质病变 微小RNA146a 白介素受体相关激酶1 肿瘤坏死因子受体相关因子6
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英汉缩略词对照表10-12
• 前言12-15
• 1 材料与方法15-21
• 1.1 患者病例选择收集15-16
• 1.1.1 患者入选标准15
• 1.1.2 患者排除标准15
• 1.1.3 患者分组15-16
• 1.2 主要实验试剂及配制16
• 1.3 主要实验仪器16-17
• 1.4 实验方法17-21
• 1.4.1 标本采集17
• 1.4.2 分离外周血单个核细胞：根据Ficoll梯度密度离心法分离PBMC17-18
• 1.4.3 总RNA的提取：按萃取法提取总RNA18-19
• 1.4.4 RNA浓度及吸光度的测定19
• 1.4.5 RNA电泳19
• 1.4.6 FQ-PCR法检测miR-146a的表达19-20
• 1.4.7 Q-PCR法检测TRAF-6、IRAK-1的表达20
• 1.4.8 实时荧光定量PCR结果数据分析20
• 1.4.9 ELISA检测TNF-α、IL-2、IL-1β20-21
• 1.5 统计学处理21
• 2 结果21-26
• 3 讨论26-29
• 4 结论29-30
• 5 展望30-31
• 参考文献31-35
• 综述35-43
• 参考文献40-43
• 攻读学位期间发表的学术论文目录43-44
• 致谢44-45

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本文编号：992281