RNAi干扰黑色素瘤细胞Notch1基因表达对小鼠肿瘤免疫机制影响

发布时间：2017-10-20 04:42

  本文关键词：RNAi干扰黑色素瘤细胞Notch1基因表达对小鼠肿瘤免疫机制影响

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【摘要】：目的探讨靶向Notch1的siRNA抑制恶性黑色素瘤Notch通路对小鼠机体抗肿瘤免疫的影响。方法采用RNA干扰小鼠黑色素瘤细胞B16F1Notch1基因的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测转染前后肿瘤细胞分泌免疫抑制因子转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的变化。制作小鼠黑色素瘤模型,在肿瘤生长过程中瘤内注射siNotch1,记录肿瘤生长情况,手术切除肿瘤组织,流式细胞术检测肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的比例,ELISA法比较各组肿瘤匀浆上清中IFN-γ和免疫抑制因子TGF-β的含量变化,免疫组化法分析肿瘤组织中FoxP3+Treg细胞的数量。结果 siNotch1转染后,成功下调了黑色素瘤细胞Notch1基因的表达。ELISA实验结果显示,转染后siNotch1组、siNC组和mock组细胞上清TGF-β分泌量分别为(0.665±0.242)、(1.413±0.153)和(1.623±0.111)ng/mL,F=40.237,P=0.000 48;VEGF的分泌量分别为(399.9±79.42)、(397.3±107.0)和(388.6±136.8)ρg/mL,差异无统计学意义,F=0.015,P=0.986;IL-10的分泌量为(38.93±12.45)、(41.84±9.85)和(45.81±9.36)ρg/mL,差异无统计学意义,F=0.525,P=0.604。siNotch1瘤内注射之后,小鼠肿瘤生长明显减慢。流式细胞术检测结果显示,siNotch1组、siNC组和mock组gp100抗原特异性CD8+T细胞的比例分别为(5.54±1.68)%、(2.43±1.09)%和(2.57±1.16)%,F=12.643,P=0.000 25。免疫组化结果显示,FoxP3平均阳性细胞数分别为23.13±6.75、38.63±10.68和41.75±12.10,F=7.802,P=0.003。肿瘤组织匀浆ELISA结果显示,siNotch1组、siNC组和mock组IFN-γ的浓度分别为(10.047±1.775)、(4.121±1.379)和(3.698±1.253)ng/mL,F=45.660,P=0.000 23;TGF-β的浓度分别为(3.738±1.203)、(7.663±2.114)和(7.545±2.080)ng/mL,F=11.687,P=0.000 39。结论 siNotch1抑制黑色素瘤细胞Notch通路后,可以降低其分泌TGF-β的含量,从而降低其对淋巴细胞的抑制作用,增加肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的浸润,促进IFN-γ的分泌,降低Treg细胞的比例,增强机体抗肿瘤免疫功能。
【作者单位】： 南方医科大学中西医结合医院肿瘤中心;怀化市第一人民医院肿瘤中心;
【关键词】： 恶性黑色素瘤 抗肿瘤免疫 siRNA瘤内注射 siNotch
【基金】：广东省自然科学基金(10251051501000008) 南方医科大学中西医结合医院院长基金(1201301001)
【分类号】：R739.5
【正文快照】： 中华肿瘤防治杂志,2015,22(12):917-923Chin J Cancer Prev Treat,2015,22(12):917-923黑色素瘤的免疫治疗在恶性黑色素瘤综合治疗中占有重要地位,免疫治疗早期效果好,但肿瘤细胞具有免疫逃逸功能,阻碍了免疫治疗疗效的有效发挥,成为恶性黑色素瘤免疫治疗方案急需跨越的最后障

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本文编号：1065311