IL-17对小鼠黑色素瘤细胞体外VEGF-a表达和血管生成拟态的影响

发布时间：2017-10-20 05:03

  本文关键词：IL-17对小鼠黑色素瘤细胞体外VEGF-a表达和血管生成拟态的影响

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【摘要】：目的 在前期研究的基础上,通过体外实验探讨IL-17对B16细胞血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)-a表达水平和对B16细胞血管生成拟态(vasculogenic mimicry, VM)的影响,从而阐明IL-17对黑色素瘤血管生成的影响。 方法 体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,用不同浓度重组鼠IL-17处理细胞,设空白对照组。分别采用MTT法和ELISA法检测不同浓度IL-17对B16细胞增殖能力和VEGF-a表达水平的影响；通过Transwell迁移、侵袭实验,明胶酶谱法和三维培养实验观察不同浓度IL-17对B16细胞迁移、侵袭能力,MMP-2、MMP-9和VM形成能力的影响；通过Western-blot和免疫荧光染色法检测B16细胞中IL-17受体(IL-17receptor, IL-17R)的表达情况。 结果 1.MTT法检测结果显示,不同浓度(5、10、20、50、100ng/mL) IL-17处理组与对照组相比,B16细胞的增殖能力无明显变化(P0.05)；ELISA法检测结果显示,不同浓度(10、50、100ng/mL)IL-17处理的B16细胞培养上清液中VEGF-a含量比对照组升高(P0.05),呈浓度依赖性。 2.观察不同浓度IL-17(10、50、100ng/mL)对B16细胞迁移、侵袭能力,MMP-2和MMP-9活性及VM的影响。Transwell迁移实验结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞穿膜细胞数比对照组明显增多(P0.05),呈浓度依赖性；Transwell侵袭实验结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞穿膜细胞数比对照组明显增多(P0.05),呈浓度依赖性；明胶酶谱法分析结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞MMP-9的活性比对照组增强(P0.05),呈浓度依赖性,lOng/mL IL-17组MMP-2活性无明显变化(P0.05),50、100ng/mLIL-17组MMP-2活性增强(P0.05)；三维培养结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞体外VM形成能力与对照组相比无明显变化(P0.05)。 3.Western-blot检测结果显示B16细胞高表达IL-17R,免疫荧光染色显示B16细胞中可见IL-17R的阳性表达,IL-17R主要定位表达于胞膜和胞浆。 结论 1.IL-17可以诱导B16细胞分泌VEGF-a。IL-17不直接影响B16细胞的增殖。 2.能力本研究中IL-17对B16细胞体外血管生成拟态无影响,但可通过增强MMP-2、MMP-9活性促进B16细胞迁移和侵袭,具有促进B16细胞转移的潜能。 3.IL-17R表达于B16细胞中,IL-17可能通过IL-17R信号通路发挥其对B16细胞的上述调节作用,其具体机制尚待进一步研究。
【关键词】：IL-17 VEGF B16细胞 黑色素瘤 迁移 侵袭 血管生成 血管生成拟态
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符号说明10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、IL-17对B16细胞增殖和VEGF-a表达的影响16-26
• 1.1 对象和方法16-20
• 1.1.1 细胞系16
• 1.1.2 主要材料与试剂16
• 1.1.3 主要器材与仪器16-17
• 1.1.4 主要溶液的配制17
• 1.1.5 主要实验方法17-19
• 1.1.6 统计方法19-20
• 1.2 结果20-21
• 1.3 讨论21-25
• 1.4 小结25-26
• 二、IL-17对B16细胞迁移、侵袭和VM的影响26-45
• 2.1 对象和方法26-34
• 2.1.1 细胞系26
• 2.1.2 主要材料与试剂26
• 2.1.3 主要器材与仪器26-27
• 2.1.4 主要溶液的配制27-28
• 2.1.5 主要实验方法28-34
• 2.1.6 统计方法34
• 2.2 结果34-39
• 2.2.1 IL-17对B16细胞迁移能力的影响34-35
• 2.2.2 IL-17对B16细胞侵袭能力的影响35-36
• 2.2.3 IL-17对B16细胞MMP-2、MMP-9活性的影响36-38
• 2.2.4 IL-17对B16细胞体外VM形成能力影响的结果38
• 2.2.5 B16细胞中IL-17R的表达情况38-39
• 2.3 讨论39-44
• 2.4 小结44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-50
• 发表论文和参加科研情况说明50-51
• 综述51-61
• 综述参考文献58-61
• 致谢61

【共引文献】

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本文编号：1065368