急性光损伤

  本文关键词：Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型表皮角质形成细胞中的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

SD大鼠皮肤光老化动物模型建立方法的探索

Construction of Photoaging Model on Sprague-Dawley Rat

中国皮肤性病学杂志 , The Chinese Journal of Dermatovenereology,
 编辑部邮箱,未收录医院皮肤科马东东
2011年03期
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【作者】 杨汝斌； 万屏； 刘玲； 何黎；

【Author】 YANG Ru-bin1,WAN ping2,LIU-ling2,HE Li2 (1. Department of Dermatology,the First People’s Hospital of Kunming,Kunming 650010,China; 2. Department of Dermatology,the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming 650032,China)

【机构】 昆明市第一人民医院皮肤科； 昆明医学院第一附属医院皮肤科；

【摘要】 目的探讨光老化动物模型造模过程中的各个关健因素,确定实用的造模方法。方法模拟日光中UV(UVA+UVB)照射SD大鼠,3次/周,共12周,累计照射剂量:UVA为148.5J/cm2,UVB为21.38J/cm2;观察照射部位皮肤的临床表现、组织病理、超微结构及生化指标的改变情况。结果经UVA联合UVB照射12周后,SD大鼠具备皮肤光老化模型的临床表现、组织病理、超微结构及生化指标的改变,提示造模成功。结论本实验中的造模关健因素简便易行,经济可靠,可复制性强,为光老化动物模型的复制建立了一种实用的方法 。 更多还原

【关键词】 光老化； 动物模型； HE染色； 超微结构；

【文内图片】

SD 大鼠皮肤外观( 正常对照组; 模型组)

SD 大鼠皮肤组织病理改变 HE ×200( 正常对照组; 模型组)

SD 大鼠皮肤中Ⅰ型胶原表达 SP ×200( 正常对照组; 模型组)

SD 真皮胶原的扫描电镜表现 SEM ×600( 正常对照组; 模型组)

SD 真皮胶原的透射电镜表现 TEM ×1 500( 正常对照组; 模型组)

【基金】 2008年云南省应用基础研究面上项目(2008ZC115M)

红景天多糖对长波紫外线致大鼠氧化损伤的保护作用

Protective Effect of Rhodiola Rosea Polysaccharide on UVA-induced Oxidative Damage in Rats

环境与职业医学 , Journal of Environmental & Occupational Medicine,
 
2012年01期
 

【作者】 黄冰洋； 魏海； 周权明； 郭婧； 钟丽婷； 沈楠； 姜艳霞；

【Author】 HUANG Bing-yang,WEI Hai,ZHOU Quan-ming,GUO Jing,ZHONG Li-ting,SHEN Nan,JIANG Yan-xia(School of Basic Medical Science,Jilin Medical College,Jilin,Jilin 132013,China)

【机构】 吉林医药学院基础医学院；

【摘要】 [目的]探讨红景天多糖对长波紫外线(ultraviolet A,UVA)辐照大鼠损伤的防护效果。[方法]用红景天多糖干预UVA辐射大鼠,检测各组血清、肝脏匀浆中超氧化物歧化物(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH),丙二醛(malondialdehyde,MDA)及羟自由基,观察红景天多糖的防护效果。[结果]981.71 J/cm2 UVA辐射组血清中SOD、GSH、抑制羟自由基能力明显低于正常对照组(P<0.05),MDA含量明显高于正常对照组(P<0.05)。经高剂量红景天多糖干预的UVA辐射组血清中GSH和抑制羟自由基能力明显高于UVA辐射组(P<0.05),MDA含量明显低于UVA辐射组(P<0.05);低剂量组MDA含量明显低于UVA辐射组(P<0.05),抑制羟自由基能力明显高于UVA辐射组(P<0.05)。肝组织匀浆中,UVA辐射组SOD活性、抑制羟自由基能力明显低于正常对照组(P<0.05);高剂量组SOD活性、抑制羟自由基能力明显高于UVA辐射组(P<0.05),M... 更多还原

【关键词】 红景天； 多糖； 长波紫外线； 氧化损伤；

【文内图片】

【基金】 吉林医药学院大学生科研基金(编号:200903)

紫外线对白念珠菌生长的影响

Effects of Ultraviolet on the Growth of Candida Albicans

【作者】 张蕾；

【导师】 程波；

【作者基本信息】 福建医科大学， 皮肤病与性病学， 2012， 硕士

【摘要】 目的比较白念珠菌标准株CAF-2经不同波长紫外线照射后，其菌丝形成率及在系统感染小鼠模型中致病力的差异，探讨紫外线在抑制白念珠菌活性中的作用，旨在寻找白念珠菌最敏感的紫外线波段，为今后研发出更高效、低毒的新型光疗方法提供理论依据。方法1、设置实验组UVA组、UVB组及对照组三组，UVA照射剂量0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm~2；UVB照射剂量0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm~2；对照组未照射紫外线，实验组隔天照射一次，共一周。2、将相同剂量（能抑制白念珠菌生长的前一组剂量）的UVA、UVB照射后及对照组的白念珠菌加入RPMI1640培养基(含NCS)置37℃水浴箱培养3小时进行菌丝诱导，高倍镜下观察菌丝形成情况。3、建立系统性白念珠菌感染小鼠模型，比较各组小鼠脾肾组织菌落形成单位(CFU)计数的差异。结果1、UVA组与对照组相比菌落偏少，不同剂量间变化不大；UVB组与对照组相比菌落明显减少，组内随着照射剂量增加，菌落明显变少；UVA组最高剂量3.0J/cm~2仍有菌落生长，UVB组2.0J/cm~2即无菌落生长；对已形成菌落且未经紫外线照射的培养皿予2.0J/cm~2UVB照射，菌落不再生长。2、UVA1.5、UVB1.5J/cm~2照射后的白念珠菌及对照组白念珠菌菌丝形成率比较（(?)±S，%）分别为：无照光组菌丝形成率（88.50±5.56），，UVA组（76.58±6.87），UVB组（22.35±8.90），差异有统计学意义。3、成功建立系统性白念珠菌感染小鼠模型，肾组织培养见酵母样菌落生长。4、脾肾组织菌落形成单位结果：各观察时间点小鼠脾肾组织CFU：无照光组>UVA组>UVB组，无照光组与UVA组，UVB组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，组间比较差异均具有统计学意(P<0.05)。结论紫外线能抑制白念珠菌生长；UVB辐射剂量和白念珠菌生长受限成正比，剂量越大，白念珠菌生长受限越大；相同剂量下UVB比UVA更能抑制白念珠菌活性，白念珠菌对UVB的敏感性明显强于UVA，28℃时UVB照射剂量≥2.0J/cm~2能抑制白念珠菌生长。 更多还原

【关键词】 白念珠菌； 紫外线； 菌丝形成率； 念珠菌病； 小鼠模型；

【文内图片】

第一次照光UVA组和对照组（剂量依次为UVA0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm2）

第三次照光UVA组和对照组

第一次照光UVB组和对照组（剂量依次为UVB0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm2）

第二次照光UVB组和对照组

第三次照光UVB组和对照组

对已形成菌落的培养皿照射2.0J/cm2的UVB，观察一周见菌落表面干燥，光泽度减小，未见变大

对照组菌丝形成图像（×400）

网络出版投稿时间】2012-10-24

Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型表皮角质形成细胞中的表达及意义

Analyze the Expression and Significant of Caspase-3、Bax、Bcl-2and Beclin-1in Epidermal Keratinocytes of Chronic UV-damaged Mice

【作者】 王莹；

【导师】 周之海；

【作者基本信息】 天津医科大学， 皮肤病与性病学， 2012， 硕士

【摘要】 随着全球环境的剧烈变化,人类生存活动受到紫外线辐射(Ultraviolet, UV)的威胁日益加剧,皮肤在接受慢性紫外线照射过程中可能出现皮肤粗糙、皱纹形成、弹性下降、色素沉着增多等,甚至可能引起各种良性或恶性肿瘤等。近年来越来越多的学者致力于慢性UV损伤的研究,但其与凋亡和自噬的关系仍未明确。目的完善建立慢性UV损伤小鼠模型。观察慢性紫外线损伤对实验小鼠背部皮肤角质形成细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Bax、Bcl-2、Beclin-1等凋亡与自噬相关蛋白表达强度的变化,分析其生物学意义。方法采用UV治疗仪(UVA+UVB)光源对实验小鼠进行照射,完善建立慢性UV损伤小鼠模型。UV照射剂量从最小红斑量(UVB0.07J/cm2,UVA0.7J/cm2)开始,每周增加0.5个红斑量,1次/d；每周照射5天,共9周。UVB总剂量达9.45J/cm2,UVA总剂量达94.5J/cm2。通过肉眼观察、组织学观察、显微镜下小鼠表皮厚度的测量及胶原纤维、弹力纤维特殊染色等方法发现实验组小鼠背部UV照光部位皮肤的临床表现和组织学改变与慢性UV损伤的人类皮肤较为吻合,确定慢性... 更多还原

【关键词】 紫外线； 角质形成细胞； 慢性UV损伤； Bax； Bcl-2； Beclin-1；

【文内图片】

SD大鼠光老化模型中氧化性损伤及灯盏花素的保护作用

Effect of breviscapin inhibiting oxidative stress in the skin of SD rat photoaging model

中国老年学杂志 , Chinese Journal of Gerontology,
 编辑部邮箱,
2012年06期
 

【作者】 杨汝斌； 万屏； 刘玲； 何黎；

【Author】 YANG Ru-Bin,WAN Ping,LIU Ling,et al. The First People′s Hospital of Kunming,Kunming 650010,Yunnan,China

【机构】 大理学院附属医院； 昆明医学院第一附属医院皮肤科；

【摘要】 目的探讨灯盏花素抗光老化的作用机制,为防治光老化性疾病提供实验依据。方法 SD大鼠随机分成6组,模拟日光中UV(UVA+UVB)长期照射,造成皮肤光老化模型。观察皮肤的组织结构和胶原纤维改变;测定各组SD大鼠皮肤中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)含量。结果灯盏花素中、高剂量组大鼠皮肤红斑、脱屑、皱纹等光老化改变明显比模型组轻。灯盏花素低、中、高剂量组皮肤光老化病理改变逐渐减轻。模型对照组SD大鼠皮肤组织中SOD、GSH-Px活性明显降低,HYP含量显著减少,MDA含量明显增加(P<0.01);灯盏花素中、高剂量组的皮肤组织中SOD、GSH-Px活性和HYP含量明显增高而MDA降低(P<0.01)。结论灯盏花素可通过抑制氧自由基的生成,降低SOD及GSH-Px消耗,提高SOD及GSH-Px活力,抑制MDA的合成和含量升高,从而减少紫外线引起的氧化损伤,发挥其抗光老化作用。 更多还原

【关键词】 灯盏花素； 光老化； 羟脯氨酸； 超氧化物歧化酶； 过氧化物酶； 丙二醛；

【文内图片】

SD 大鼠皮肤外观

SD 大鼠皮肤组织病理改变( HE，×200)

【基金】 云南省应用基础研究面上项目(2008ZC115M)

1320nmND：YAG激光治疗皮肤光老化的动物实验研究

【作者】 尚君兰；

【导师】 李付广；

【作者基本信息】 郑州大学， 免疫学， 2012， 硕士

【摘要】 背景与目的皮肤光老化主要指人的皮肤受紫外线等外界环境因素的影响出现衰老的现象,主要表现为皮肤粗糙、皱纹色斑出现等,不仅影响一个人的外表,而且与皮肤癌有正相关性,它的发病机制目前不完全清楚。皮肤光老化的治疗方法较多,YAG激光治疗是近几年发展起来的除皱紧肤术,具有创伤小,临床愈合快的特点,在临床上治疗皮肤光老化取得了不错的疗效,但其具体治疗机制目前并不清楚。本研究通过大鼠皮肤光老化动物模型,进一步研究皮肤光老化和YAG激光治疗的机制,以期对皮肤光老化的临床治疗有所帮助。方法选取雄性SD大鼠40只作为研究对象,随机选取10只作为对照组,其余30只复制皮肤光老化模型,模型复制成功后再随机分成三组(光老化组、激光治疗组、自然恢复组),每只大鼠皮肤处理部位分别做组织病理HE染色,并提取RNA,逆转录成cDNA,做SYBR Green Ⅰ real time PCR检测四组大鼠皮肤中β-actin、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、CTGF、TGF-β1的mRNA表达情况。结果肉眼观察：光老化组大鼠背部皮肤增厚,粗糙,出现较深皱纹,经YAG激光治疗后大鼠皮肤光老化症状减轻,而自然恢复组变化不明显；显微镜观察：光老化组大鼠皮肤HE染色,表皮紊乱,疏松增厚、厚薄不均,真皮胶原纤维断裂、排列扭曲紊乱,有炎性细胞浸润,YAG激光治疗后,症状明显改善；与对照组相比,光老化组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、CTGF、TGF-β1mRNA表达明显降低,YAG激光治疗后,这些基因mRNA表达明显升高,激光治疗组与自然恢复组相比,除CTGF外,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-p的mRNA表达均明显升高。结论1320nmND:YAG激光治疗大鼠皮肤光老化效果显著,其治疗机制可能与其能够刺激皮肤中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1mRNA表达升高有关。 更多还原

【关键词】 光老化； 动物模型； Ⅰ型胶原； Ⅲ型胶原； 转化生长因子-β1； 结缔组织生长因子； 大鼠；

【文内图片】

网络出版投稿人】 郑州大学

网络出版投稿时间】2012-07-10 【网络出版年期】2012年 10期

分类号】R758.1

【下载模拟干细胞Niche同步实现表皮干细胞扩增与皮肤替代物构建的实验研究

Mimicking Stem Cell Niche for Amplification of ESCs and Construction of Skin Substitute in One-step

【作者】 纪世召；

【导师】 夏照帆；

【作者基本信息】 第二军医大学， 外科学， 2012， 博士

【摘要】 研究背景表皮干细胞主要位于皮肤基底层和毛囊隆突部，由于细胞数量相对较少且增殖慢，因此如何快速扩增表皮干细胞一直是皮肤组织工程研究中的热点和难点。目前主要利用表皮干细胞对基底膜的显著黏附特性进行分离、纯化，采用二维平面的培养方式进行培养，同时为了保证干细胞的单一及清除分化增殖能力不强的细胞，传代扩增时需要首先将基底膜的主要成份之一Ⅳ型胶原平铺于培养皿，但仍然难以避免多次传代培养后细胞克隆形成率明显下降、细胞逐渐分化、增殖活性降低等缺点，而且由于表皮干细胞固有的慢增殖特性，传统的二维培养方式难以在较短时间内扩增足量的细胞。微载体培养是一种大规模扩增贴壁依赖型细胞的技术，提供了细胞单层培养时不具备的三维立体空间，模拟了细胞在体内的生长环境，不仅可以大量扩增细胞，而且有利于维持细胞表型、防止分化，现已广泛地应用于生物制药领域。最近，有研究者采用微载体培养技术扩增干细胞取得良好效果，如以Cultispher-S、Cytodex、Solohill、Matrigel-coated cellulose等扩增间充质干细胞及胚胎干细胞，不仅在短时间内可大量扩增，而且维持其多向分化潜能。因此我们设想，采用微载体技术为表皮干细胞提供更适于其生长、增殖的三维立体空间。然而，目前研制的微载体多以生物材料人工合成，尽管有研究者采用表面改良或修饰等仿生技术处理，但缺乏基底膜结构，仍难以模拟表皮干细胞生长的体内niche微环境，不利于表皮干细胞的粘附、增殖。研究表明人羊膜是理想的细胞培养扩增载体，具有天然的人体最厚的基底膜，其基本结构与皮肤、角膜基底膜相似，此外基质中含有丰富的生长因子，如NGF、HGF、KGF、bFGF、TGF-β1、EGF等，可以在体外模拟干细胞生长的niche微环境，因此羊膜被用于角膜缘干细胞、间充质干细胞的扩增和移植。本研究利用羊膜固有的生物学特性，制备具有完整基底膜结构和生物学活性的三维立体微粒羊膜，以其作为一种天然的新型微载体，结合旋转培养系统进行表皮干细胞的体外培养与扩增，评价其培养、扩增表皮干细胞的效果及维持干细胞特性的作用。在此基础上构建含表皮干细胞的皮肤替代物，并评估其作为皮肤替代物修复全层皮肤缺损的可行性。研究方法1．羊膜微载体的制备及特征检测1.1羊膜获取及微载体制备经医院伦理委员会批准，产妇知情同意，选择肝炎病毒抗体、梅毒抗体及HIV均为阴性的剖腹产妇的胎盘组织，钝性分离绒毛膜，剥离羊膜。采用反复冻融结合DNA酶消化法去除羊膜细胞，片状羊膜经冷冻裂解技术均质化制备微粒，然后在真空密闭条件下冷冻干燥，通过金属筛网筛选过滤，获得300-600μm的微粒羊膜。1.2羊膜微载体物理特征及组织结构检测采用扫描电镜观察mAM的形状及大小，石蜡包埋切片HE染色及表面HE染色观察羊膜细胞的去除情况及组织结构，免疫组化染色和透射电镜观察mAM保留的基底膜结构。1.3生长因子及DNA含量分析Western blotting、Elisa测定mAM基质中的生长因子含量：EGF、bFGF、HGF、TGF-β1、KGF，NGF。DNA试剂盒测定DNA含量，Hoechst染色观察mAM表面残存DNA情况。1.4mAM组织相容性检测通过mAM浸提液实验观察mAM基质对细胞的毒性，大鼠皮下移植实验评价mAM的组织相容性，Masson三色染色检测羊膜胶原基质降解过程。2．mAM培养、扩增表皮干细胞并构建皮肤替代物2.1mAM培养、扩增表皮干细胞分离培养表皮干细胞，以mAM作为微载体，结合旋转培养系统培养扩增表皮干细胞，定期取材标本以hoechst33342荧光标记，荧光显微镜下观察表皮干细胞黏附增殖情况。2.2表皮干细胞增殖活性及特性检测以常规二维培养作为对照，采用CCK-8测定微载体培养、扩增表皮干细胞的增殖活性，免疫组化检测表皮干细胞的表面特征标记：β1整合素、CK19、P63及CK10的表达情况。2.3构建并扩增含表皮干细胞的皮肤替代物以mAM作为真皮支架，在三维旋转培养体系下，种植表皮干细胞，构建含表皮干细胞的皮肤替代物，借助“球碰球”传接技术，通过加入新的羊膜微载体扩增皮肤替代物。行组织切片HE染色及电镜扫描观察含表皮干细胞皮肤替代物的形态特征。2.4皮肤替代物移植全层皮肤缺损创面以裸鼠全层皮肤缺损创面为动物移植模型，将构建好的含表皮干细胞的皮肤替代物移植创面，观察其修复全层皮肤缺损创面的效果，定期测定创面愈合率，并行组织学检测。研究结果1.mAM物理特性及DNA含量通过物理反复冻融3次，辅助DNase酶消化可完全去除羊膜中的细胞及核酸，利用冷冻裂解技术可制备mAM，其外观白色、半透明状，呈六面体，形状不规则，大小在300-600μm之间，厚度为80-250μm。mAM基质中核酸基本去除干净，去除率达85±4.15%。2.mAM组织结构及生长因子检测mAM基底膜结构保存完整，羊膜上皮细胞、成纤维细胞等去除完全，胶原组织连续、排列规则，可见层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白连续分布，贯穿于整个基底膜，同时基质中保留了多种生长因子：NGF、HGF、KGF、bFGF、TGF-β1、EGF。3.mAM浸提液毒性及组织相容性评价mAM浸提液细胞培养发现不含任何毒性，而且以其培养细胞增殖速度明显高于对照组。大鼠皮下移植发现mAM组织相容性良好，移植后未见明显急性炎症或排斥反应，14d时显示许多微血管形成，30d时mAM开始降解，90d时基本降解完全，与周围组织融合，胶原纤维排列整齐。4.mAM培养、扩增表皮干细胞表皮干细胞种植后半小时即可见粘附于mAM表面，呈立体三维生长。培养第3天开始mAM培养扩增细胞相对增殖活性即明显高于培养皿，培养7、14天时，相对增殖活性分别为326±28%、535±47%，远高于常规的培养皿培养方法（232±21%，307±32%，P＜0.05）。同时干细胞特征检测可见表皮干细胞高表达β1整合素、K19及P63。5.构建并扩增含表皮干细胞的皮肤替代物以mAM为真皮支架，表皮干细胞为种子细胞可成功构建含表皮种子细胞的活性皮肤替代物，培养14d表皮干细胞已形成2-3层。利用“球碰球”传接技术，通过加入新的mAM即可实现快速扩增含表皮干细胞的皮肤替代物。6.皮肤替代物移植修复全层皮肤缺损创面移植后2周，可见ESC-mAM组新生表皮形成，而对照组可见残存创面，创面收缩明显；移植后4周可见ESC-mAM、mAM组愈合表皮下微粒充填真皮基质，ESC-mAM组伴有表皮乳突样结构形成，类似正常皮肤，而对照组表皮细胞基底处平整未见乳突样结构形成。研究结论1、反复冻融辅助DNA酶消化法可有效去除羊膜细胞成份，结合冷冻裂解可以制备微粒羊膜，其不仅具备一般微载体的特性，而且具有完整的基底膜结构，同时基质中保存了多种生物活性物质。2、微粒羊膜作为一种新型的微载体，可以为表皮干细胞的体外培养、扩增提供近似体内生理的Niche微环境，可在迅速扩增表皮干细胞的同时，维持干细胞增殖活性，防止其分化。3、微粒羊膜具备良好的组织相容性，可以作为真皮支架快速构建含表皮干细胞的皮肤替代物，并修复全层皮肤缺损创面，改善创面愈合质量。即mAM可以同步完成表皮干细胞的大量扩增与皮肤替代物的快速构建。4、通过加入新的羊膜微载体的方式即可以实现含表皮干细胞皮肤替代物的快速扩增，缩短了体外培养时间，改善了皮肤替代物的传统构建模式，提高了皮肤替代物从实验室构建到临床应用的效率，为促进皮肤替代物向临床转化与应用提供新方法和新思路。

  本文关键词：Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型表皮角质形成细胞中的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。