Th17细胞在银屑病发病中的作用及意义研究

发布时间：2018-02-07 12:49

本文关键词： 银屑病 Th17细胞 IL-23R 单核苷酸多态性遗传学 IL-17 流式细胞染色甲氨蝶呤　出处：《南方医科大学》2010年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 银屑病是一种常见的慢性炎症性疾病,易复发,难治愈,患病率为1-3%左右,近年来银屑病的发病率在不断上升。由于该病反复发作,常需反复治疗,因而给患者及其家庭带来沉重的经济负担,对患者的身体健康和精神影响甚大。银屑病的病因复杂,其发病机理尚不明确,目前认为银屑病的发病主要涉及免疫、遗传、心理、环境因素等方面。银屑病的主要病理改变为角质形成细胞异常增生、角化不全、新生血管形成和炎性细胞浸润。现在普遍的观点为：银屑病的发病是一种多基因遗传多因素作用参与的T细胞免疫介导性皮肤病,其发病机制复杂。其中CD4+T淋巴细胞免疫功能异常在其发病中尤为重要。CD4+T淋巴细胞一直被划分为Th1和Th2两大类。Th1分泌IFN-γ和IL-12等细胞因子,在清除胞内菌时起重要作用；而Th2分泌IL-4、IL-2等细胞因子,主要影响寄生虫和胞外菌的清除,IFN-γ和IL-4分别是Th1和Th2细胞亚群标志性细胞因子。近年来,又发现了一类新的CD4+T细胞亚群Th17细胞,高表达IL-17,同时也分泌IL-6和TNF-α。Th17具有独立的分化和发育调节机制,在免疫性疾病和感染性疾病中发挥重要调节作用,是目前的研究热点之一。IL-23主要作用于Th17细胞,维持其表达,研究证实IL-23刺激Th17细胞的扩增和维持,且Th17细胞在人体中的分化依赖于IL-1β和IL-23。故IL-23R对Th17细胞亚群来说是一个关键的作用因子。IL23-IL23R-TH17-IL17轴在自身免疫性疾病中的致病性已被证实。过去认为银屑病是Th1介导的免疫性疾病,伴有IFN-γ信号转导途径。Austin等分离出银屑病患者皮损处T细胞,通过流式细胞仪分析发现绝大部分CD4+和CD8+细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α,而11%的T细胞表达IL-4或IL-10,国内何玉清等的研究同样发现了Th1细胞分化偏态性。这表明以IL-2、IFN-γ、TNF-α为代表的Th1细胞因子在银屑病发病机制中起重要作用。有研究报道Th17和强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮等疾病的发病中起重要作用。近年来Th17细胞在银屑病发病过程中的作用越来越引起人们的重视。最近研究表明,在银屑病皮损中可检出白细胞介素-17(IL-17)mRNA,而非皮损处未检出。研究结果还进一步发现银屑病皮损来源的大多数CD4+和CD8+T细胞表达IL-17,而与IFN-γ, IL-4的表达不相关。国内学者也发现寻常型银屑病患者皮损中IL-17, IFN-γ的表达水平较正常人皮肤组织明显增高。这一结果说明银屑病患者皮损中存在Th17细胞,并在银屑病的发病中发挥重要作用。Th17在银屑病发病中的作用已成为国内外研究的热点之一。甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)因其起效快、疗效好、经济等原因,已被用于银屑病治疗。有研究表明系统性应用MTX能减少银屑病皮损内T细胞的数量,但对银屑病皮损内及血液中免疫细胞及细胞因子的调控作用尚未清楚。且国内外关于MTX治疗银屑病的基础研究报道较少。本研究拟评价银屑病患者的Th17细胞在外周血PBMC的表达及其与银屑病临床的相关性及意义,并观察MTX治疗寻常性银屑病患者对Th17细胞相关细胞因子的影响作用,探讨MTX治疗银屑病新的作用机制。此外进一步在中国汉族人群中鉴定与银屑病相关的IL-23R基因的变异体区域,探讨IL-23R基因多态性与汉族人银屑病易感性的关系。第一部分：探讨寻常性银屑病患者外周血中Th17细胞的变化与银屑病临床相关性及意义目的探讨银屑病患者的Th17细胞在外周血PBMC的表达及与其临床相关性,初步明确Th17细胞在银屑病发病中的作用机制及临床意义。方法抽取43例寻常性银屑病患者,其中进行期为25例,静止期18例及30例正常人对照组外周血,采用流式细胞术检测外周血单核细胞CD4(+)IL-17(+)细胞表达水平,并分析进行期银屑病组和静止期银屑病组与正常对照组差异。结果流式细胞染色示,银屑病患者PBMC CD4(+)IL-17(+)细胞数量相对于正常人显著性上调(t=12.057,P0.001),正常对照组、进行期组、静止期组三者有差别(F=142.34,P0.001)。且银屑病患者PBMC CD4(+)IL-17(+)的表达与寻常性银屑病严重程度指数PASI呈显著正相关。结论银屑病患者外周血Th17细胞数量上调,Th17数量水平与寻常性银屑病严重程度呈显著性正相关,Th17细胞在银屑病的发病中可能有着重要作用,Th17细胞可能参与银屑病的发生发展的病理生理过程。提示针对Th17的生物靶向治疗也许可以作为治疗银屑病的新的有效方法。第二部分Th17细胞相关细胞因子在寻常性银屑病患者皮损及外周血清中的检测及其临床意义探讨目的检测寻常性银屑病患者外周血及局部皮损组织中Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-23的表达水平,明确银屑病患者与正常人之间、不同期银屑病患者之间Th17细胞相关细胞因子表达的差异及其血清水平检测的临床意义,并观察甲氨蝶呤(MTX)对银屑病患者Th17细胞相关细胞因子表达的影响,以期进一步探讨Th17细胞在银屑病致病机理中发挥的作用及MTX治疗寻常性银屑病新的作用机制。方法寻常性银屑病患者35例,正常人对照组30例,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-17、IL-23水平；应用巢式聚合酶链反应方法(nested polymerase chain reaction)检测皮损或皮肤组织中IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达水平。并动态观察治疗前后IL-17、IL-23的变化与寻常性银屑病患者病情活动指标之间的关系。结果 (1)寻常性银屑病患者皮损内IL-17mRNA、IL-23mRNA表达水平高于正常人对照组(t值分别为8.341,8.748；P值分别为1.235×10-9,4.130×10-10)。银屑病患者经过MTX治疗8周后,皮损明显改善,皮损内IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达水平低于银屑病患者治疗前的表达水平(t值分别为57.86,7.20；P值均0.001),但与正常对照者皮肤中的表达水平无统计学差异(t值分别为1.220,0.461,P值均0.05)。 (2)寻常性银屑病患者外周血清中IL-17、IL-23的浓度较正常人对照组显著增高。IL-17、IL-23血清水平与寻常性银屑病的分期有关,其中进行期患者组显著高于静止期患者组(F值分别为38.56,42.27；P值均0.001)。经MTX治疗8周后血清中IL-17、IL-23水平均较治疗前显著下降,与正常对照者皮肤中的表达水平无统计学差异(F值分别为107.76,27.21；P值0.001)。 (3)寻常性银屑病患者皮损内IL-17mRNA与IL-23mRNA二者的表达呈显著正相关(r=0.469,P=0.0112)。寻常性银屑病患者IL-17、IL-23的血清浓度变化与寻常性银屑病严重程度指数PASI评分有相关性(r分别为：0.732、0.611,P值分别为0.022,0.275)。而IL-17与IL-23血清浓度之间有显著相关性(r=0.684,P=0.014)。结论 (1)结果提示寻常性银屑病患者外周血及局部皮损中Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-23的表达水平均显著高于正常对照,且进行期患者明显高于静止期患者,提示Th17细胞相关细胞因子可能在寻常性银屑病的发病中起重要作用,银屑病患者外周血及局部皮损中IL-17、IL-23细胞因子水平可望作为评价银屑病判断病情和预后的指标。 (2)MTX能调节银屑病患者的免疫功能,通过抑制Th17细胞的功能而发挥作用。这有可能是MTX治疗银屑病的作用机理之一。第三部分汉族人银屑病患者IL-23R单核苷酸多态性的研究目的探讨白细胞介素-23受体(IL-23R)基因多态性与中国汉族人群银屑病易感性的关系。方法在NCBI数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上检索IL-23R的7个SNP位点(rs11209026、rs1004819、rs10489629、rs1343151、rs10889677、rs11209032、rs1495965)。从门诊病人中收集银屑病患者93例,正常对照者108例。检测该201例样品中7个SNP位点与银屑病易感性的关系。多态性及其单倍型与银屑病相对危险度等数据处理均采用SPSS软件系统进行。结果 7个TagSNP位点中的4个等位基因(rs1004819、rs1343151、rs10889677、rs1495965)频率在病例组和对照组之间的差异有显著性(P＜0.001)。结论 IL23R基因多态性与汉族人银屑病易感性有关联。其中4个SNP位点(rs1004819、rs1343151、rs10889677、rs1495965)与银屑病发病显著相关。
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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R758.63

【引证文献】