siRNA联合沉默MMP-9和FAK基因对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭和迁移的影响
本文关键词： MMP- FAK RNA 干扰 黑色素瘤 出处：《中国生物工程杂志》2014年09期 论文类型：期刊论文
【摘要】：目的:观察双基因联合干扰MMP-9和FAK对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭、迁移能力的影响。方法:分别构建pGV102-MMP9-siRNA,pGV102-FAK-siRNA重组质粒载体,脂质体~(TM)2000介导转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞,实验分为空白对照组、Anti-MMP-9组,AntiFAK组、Anti-MMP-9FAK组、阴性对照组。经G418筛选GFP+克隆,流式细胞仪分析阳性率,激光共聚焦观察转染后细胞形态,半定量RT-PCR检测各组B16F10细胞MMP-9和FAK基因的mRNA转录水平,Transwell侵袭、迁移实验测定各组B16F10细胞体外侵袭、迁移能力。结果:经G418筛选,3个转染组阳性率分别为92.41±1.64%,95.72±0.21%,91.52±0.11%,且转染后细胞形态良好;与空白对照组相比,3个转染组的MMP-9,FAK mRNA转录水平下降明显(P0.01),迁移、侵袭能力明显降低(P0.01),但Anti-MMP-9FAK组细胞侵袭迁移能力显著低于Anti-MMP-9组和Anti-FAK组(P0.01)。结论:相比单独沉默MMP-9或FAK,联合沉默MMP-9和FAK可明显降低小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外迁移、侵袭能力。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of two genes combined with interference of MMP-9 and FAK on the invasion and migration of mouse melanoma cell line B16F10 in vitro. Methods: pGV102-MMP9-siRNA-pGV102-FAK-siRNA recombinant plasmid vector was constructed and transfected into murine melanoma B16F10 cell line mediated by liposome / TMF2000. The experiment was divided into two groups: Anti-MMP-9 group, anti-MMP-9 group and anti-MMP-9 FAK group, negative control group. GFP clones were screened by G418, positive rate was analyzed by flow cytometry, and morphology of transfected cells was observed by confocal laser. The mRNA transcription level of MMP-9 and FAK gene in B16F10 cells was detected by semi-quantitative RT-PCR, and the invasion and migration ability of B16F10 cells in vitro was measured by migration assay. Results: the positive rates of the three transfection groups were 92.41 卤1.64 + 95. 72 卤0. 21 + 91. 52 卤0. 11, respectively, and the morphology of the transfected B16F10 cells was good. Compared with the control group, the transcription level of MMP-9 and FAK mRNA in the three transfection groups decreased significantly (P 0.01) and migrated. The invasion ability of B16F10 cells in Anti-MMP-9FAK group was significantly lower than that in Anti-MMP-9 group and Anti-FAK group. Conclusion: compared with MMP-9 or FAK alone, combined silencing of MMP-9 and FAK can significantly reduce the migration and invasion ability of murine melanoma B16F10 cells in vitro.
【作者单位】： 西南大学生物技术学院;重庆医科大学生物医学工程学院
【基金】：国家“973计划”项目资助(2012CB722402)
【分类号】：R739.5
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 朱耀德;恶性黑色素瘤[J];徐州医学院学报;1982年01期
2 何振辉;何太平;翁闪凡;黄越群;梁念慈;;芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响[J];中国药理学通报;2013年08期
【共引文献】
相关期刊论文 前8条
1 梁迎春;程龙;叶棋浓;;肿瘤基因治疗的研究进展[J];生物技术通讯;2012年03期
2 秦涛;付强;潘延凤;刘传江;王玉柱;胡明星;唐强;张宏伟;;Expressions of miR-22 and miR-135a in Acute Pancreatitis[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年02期
3 杨艳丽;李鹏鸽;葛玉婷;尹田乐;侯颖春;;黏着斑激酶与肿瘤发生、发展及预后的关系[J];中国细胞生物学学报;2011年01期
4 路娜;吴素慧;范锦;陶慧娟;尚海霞;;基质金属蛋白酶-9基质金属蛋白酶-2在宫颈癌细胞株中的表达及意义[J];中国药物与临床;2010年08期
5 胡宇敏;旷寿金;;VEGF和支气管哮喘的关系[J];中外医学研究;2014年11期
6 王德生;蒋远伟;黄建民;林树春;赖海春;;CD147和MMP-9在喉鳞癌中的表达及意义[J];西安交通大学学报(医学版);2014年03期
7 刘超;仰曙芬;付玉;;MMP2、MMP9与结直肠癌的研究进展[J];中华结直肠疾病电子杂志;2014年03期
8 杨超;陈颖;田巍;朱驹;;黏着斑激酶及其小分子抑制剂作为抗肿瘤药物的研究进展[J];药学进展;2014年09期
相关会议论文 前1条
1 高尚;董频;李大伟;沈斌;;FAK及FAKpY397在喉癌中的表达及意义[A];第十次全国中西医结合耳鼻咽喉科学术会议论文汇编[C];2010年
【二级参考文献】
相关期刊论文 前3条
1 朱耀德,陈镇东,吕泰忠,陈福泰;原发性粘膜恶性黑色素瘤35例临床病理研究[J];徐州医学院学报;1980年02期
2 黄蕊;姜琳琳;孙晓明;周圆;程昕;杨铭;许元富;熊冬生;王彩云;杨纯正;潘兵;朱惠芳;;钙调素拮抗剂EBB抑制ES-2细胞转移作用机制初探[J];中国药理学通报;2010年05期
3 魏彩;秦宜德;郑欣;何晓光;张文晓;杨浩然;;乳源免疫调节肽体外抑制人卵巢癌细胞侵袭和转移[J];中国药理学通报;2013年01期
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 赵万洲,刘红岩,徐少锋,Frank Entschladen,Bernd Niggemann,KurtS.Zaenker,韩锐;小鼠黑色素瘤某些生物学特性与其侵袭潜能的相关性研究[J];中华肿瘤杂志;2001年04期
2 房东亮;马跃美;赵秀兰;孙涛;刘艳荣;王倩;田原;;慢性炎症对小鼠黑色素瘤血管生成的影响[J];天津医药;2013年03期
3 成秉辰;;千里光总碱对体外培养的小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响[J];黑龙江医学;2009年01期
4 何永林;杨春;张黎;徐蕾;王瑜伟;;携带颗粒溶素活性肽基因的减毒沙门菌对小鼠黑色素瘤的治疗作用[J];中国生物制品学杂志;2011年12期
5 王光凤;肖t，
本文编号：1541691
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/pifb/1541691.html
