Epiplakin基因敲除鼠和野生鼠舍的超微结构观察比较

发布时间：2018-03-10 23:49

  本文选题：Epiplakin　切入点：基因敲除　出处：《河北医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：Epiplakin（EPPK）属于plakin家族，是一种细胞骨骼连接蛋白，是在表皮下水疱病患者血清中发现的一种自身抗原，在复层上皮及单层上皮都有表达，与中间丝关系密切。在正常情况下Epiplakin基因敲除鼠（EPPK-/-鼠）和野生鼠的表型无明显差异。然而在伤口愈合过程中，基因敲除鼠的角蛋白的迁移加速。EPPK缺乏的角质细胞中角蛋白丝的直径减小。免疫电镜研究显示EPPK与K5，K10和K6在伤口边缘共存。这个数据表明在伤口愈合过程中，EPPK在增殖的角质细胞中加速了角蛋白的结合成束；并在有压力的情况下， EPPK可能有助于加强角蛋白网状结构。截止目前为止，尚未见有关EPPK-/-鼠和野生鼠舌的超微结构变化的研究，激光扫描共聚焦显微镜观察到野生鼠舌中有丰富的EPPK表达，透明角质颗粒参与角蛋白的形成。本研究拟运用透射电子显微镜技术观察EPPK-/-鼠和野生鼠舌的超微结构变化，特别是透明角质颗粒的变化，进一步探索EPPK与角蛋白之间的关系及功能。 方法：将野生鼠和EPPK-/-鼠鼠舌平均分8部分，从舌尖到舌根方向依次编号1-8号。首先应用光学显微镜观察EPPK-/-鼠和野生鼠舌粘膜上皮的结构，然后应用透射电子显微镜从冠状面对应编号观察并比较其超微结构变化，特别是透明角质颗粒的变化。 结果： 1光镜观察 1.1野生鼠舌粘膜上皮由下而上可见四层结构。基底层细胞呈立方形，细胞排列呈波浪样起伏。棘层细胞呈圆形。基底层和棘层未见透明角质颗粒。颗粒层细胞呈扁平形，在此层舌粘膜乳头间可见密集透明角质颗粒呈层状分布，其大小不一（见Fig1、3、5）。透明角质颗粒在HE染色中呈强嗜碱性。角化层细胞扁平，覆盖在舌表面，未见透明角质颗粒。乳头部可见透明角质颗粒沿突起呈线状排列，但数量较乳头之间部位少（见Fig1、3、5）。舌根的粘膜没有乳头。舌根粘膜也分为4层，角质层不如舌尖厚，其他三层细胞形态无明显差异，颗粒层中透明角质颗粒不如舌尖密集（见Fig7）。 1.2EPPK-/-鼠舌粘膜上皮分4层，基底层呈柱状，细胞呈波浪状起伏排列。棘层细胞呈圆形。基底层和棘层未见透明角质颗粒。颗粒层可见透明角质颗粒稀少，分布零散，分布无规律（见Fig2、4、6）。角质层细胞扁平，未见透明角质颗粒。舌乳头基底部细胞呈柱状，无透明角质颗粒，游离部可见透明角质颗粒，数量稀少（见Fig2、4、6）。舌根部无舌乳头，舌根粘膜结构同舌尖乳头之间的结构无明显差异，透明角质颗粒稀少，分布零散（见Fig.8）。 2透射电子显微镜观察 2.1低倍（4000倍）透射电镜下，野生鼠舌粘膜上皮细胞外形规则，基底层细胞呈长的椭圆形，长轴与基底垂直。棘层细胞的长轴与基底平行，，在此层可见透明角质颗粒分布，呈圆形，数量不多。颗粒层可见大量透明角质颗粒，呈圆形，主要在乳头之间分布（见Fig9）。角质层细胞几乎无透明角质颗粒。EPPK-/-鼠舌粘膜上皮基底层细胞呈柱形，无透明角质颗粒分布。棘层细胞形状似圆形，几乎无透明角质颗粒。颗粒层可见透明角质颗粒，类圆形，分布零散（见Fig10）。各层细胞之间连接未见明显异常。 2.2高倍（25000倍）透射电镜观察：野生鼠透明角质颗粒外围部分电子密度较中央部位高（见Fig11、13）；细胞之间连接紧密（见Fig11、13、15）；张力细丝正常。EPPK-/-鼠透明角质颗粒电子密度均一(见Fig.12、14)，细胞连接较疏松（见Fig.12、14、16）细胞质中的线粒体及高尔基体等细胞器未发现明显异常。此高倍透射电镜观察结构经ACDsee图像软件处理后发现：EPPK-/-鼠的张力细丝较野生鼠的细。 结论： 1光镜观察发现EPPK-/-鼠与野生鼠的舌粘膜上皮结构相比较，EPPK-/-鼠舌粘膜上皮颗粒层中的透明角质颗粒数量较野生鼠明显减少。 2电镜观察发现EPPK-/-鼠舌粘膜上皮中的透明角质颗粒较野生鼠舌粘膜上皮中的透明角质颗粒：直径小；数目少；并缺少野生鼠透明角质颗粒高电子密度的外围部分。EPPK-/-鼠舌粘膜上皮的细胞连接不紧密。张力细丝较细。 总之，Epiplakin基因表达缺失引起了舌粘膜上皮细胞超微结构的变化，尤其是透明角质颗粒的变化最明显。
[Abstract]:Objective: Epiplakin (EPPK) belongs to the plakin family, is a kind of cell skeleton connection protein, is launching a blistering disease in patients found self antigens in the epidermis in stratified epithelium and epithelial monolayers have close relationship with the expression of intermediate filaments. Under the condition of normal Epiplakin gene knockout mice (EPPK-/- mice no significant difference) and the wild mouse phenotype. However, in the process of wound healing, keratin filament keratin gene knock in mouse migration accelerated.EPPK deficient keratinocytes in diameter decrease. Study on immune electron microscopy showed EPPK and K5, K10 and K6 in the wound edge coexist. The data show that in the process of wound healing EPPK, on the proliferation of keratinocytes in accelerated with keratin bundles; and under pressure, EPPK may help strengthen the keratin network structure. So far, no relevant EPPK-/- mice and wild-type mice of tongue Study on the change of micro structure, laser scanning confocal microscope to observe expression of EPPK rich wild rat tongue, the formation of keratohyalin granules in keratin. This study ultrastructural changes by transmission electron microscopy of EPPK-/- mice and wild-type mice of the tongue, especially the changes of keratohyalin granules, and to further explore the relationship between the function between EPPK and keratin.
Methods: wild rats and EPPK-/- mouse tongue average is divided into 8 parts, respectively from the tip of the tongue to the back direction of No. 1-8. The first application structure of optical observation of lingual epithelium of EPPK-/- mice and wild-type mice microscope, then the application of transmission electron microscope from the coronal plane should be numbered and observed and compared the ultrastructural changes, especially the change of keratohyalin particles.
Result锛

本文编号：1595616