进行性斑状色素减少症致病菌分子生物学鉴定及发病机制初步探讨

发布时间：2018-03-17 12:26

  本文选题：丙酸杆菌　切入点：色素减退　出处：《安徽医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：进行性斑状色素减少症（progressive macular hypomelanosis，PMH）是一种易被误诊的色素减退性皮肤病，其临床特征为躯干部对称出现边界不清的圆形、椭圆形色素减退斑，并常于躯干中线处融合成片状。它不痒不痛也无炎症。20世纪80年代，为了描述一种发生于法国人身体上的色素紊乱皮肤病，Guillet等人首次提出了进行性斑状色素减少症，世界各地陆续均有报道，近年来国内分别以“花斑癣样色素减退”、“青少年特发性浅色斑”进行过报道。但目前缺乏公认的诊断标准，且该病的发病机制尚不清楚，主要由以下四种假说：○1基因‘融合’学说○2遗传学说○3真菌感染学说○4痤疮丙酸杆菌学说；目前较为认可的是痤疮丙酸杆菌感染学说[2]，但国内尚无对该病致病菌及作用方式相关方面的研究。目的：对进行性斑状色素减少症（PMH）患者所分离的致病菌进行初步鉴定和分析；并将PMH患者皮损分离出的痤疮丙酸杆菌加入角质形成细胞（HaCat株）的培养体系，以痤疮患者皮损处分离出的痤疮丙酸杆菌及痤疮丙酸杆菌标准株（NCTC737）做对照组，来观察不同来源细菌对HaCat细胞株分泌IFN-γ、IL-6、TNF-α细胞因子的影响，从而推测可能的发病机制。 方法： 需氧法、厌氧法分别从PMH及痤疮患者皮损处培养病原菌，应用革兰氏染色、ATB Rapid ID32A系统鉴定及细菌16sDNA测序鉴定，将测序结果通过Blast比对，与已知菌进行同源性分析，确定细菌种属。然后用DNASTAR建立细菌的系统发育树。取正常人（色素痣患者）皮肤细菌培养做对照。 将PMH患者皮损分离出的痤疮丙酸杆菌加入角质形成细胞（HaCat株）的培养体系，以痤疮患者皮损处分离出的痤疮丙酸杆菌及痤疮丙酸杆菌标准株（NCTC737）做对照组，来观察不同来源细菌对HaCat细胞株分泌IFN-γ、IL-6、TNF-α细胞因子的影响。 结果： 1.WOOD灯观察 41例PMH患者中35例皮损区灯下可见局限性点状红色荧光，占85.4%，正常皮肤处未见点状红色荧光。295例寻常型痤疮患者中，195例粉刺型中，其中90例可见红色荧光，183例丘疹型中痤疮患者中17例可见红色荧光。 2.病原菌的分离培养和鉴定 11例PMH患者正常皮肤处取材培养，在常规血平板和厌氧血平板中均未见菌落形成；皮损区取材作需氧及厌氧培养，需氧培养的未发现有菌落生成，厌氧培养有9例有菌落形成，菌落为圆形、白色、不透明、光滑、不溶血伴有臭味，Wood灯下表现为红色荧光，革兰氏染色阳性，短棒状杆菌、无芽孢、荚膜和鞭毛，经ATB Rapid ID32A系统鉴定为痤疮丙酸杆菌。用厌氧培养法从13例寻常型痤疮皮损做培养，9例培养出革兰氏阳性菌，经鉴定7株均为痤疮丙酸杆菌，1株为肠杆菌，1株为Lysinibacillus菌。正常人（色素痣患者）皮肤组织培养未见细菌生长。 3.16sDNA测序分析及系统发育树的建立 分别对来自面部寻常型痤疮皮损处的痤疮丙酸杆菌和PMH背部皮损处培养的痤疮丙酸杆菌进行16sDNA测序，测序结果经Blast分析16株为痤疮丙酸杆菌（9株来自于PMH患者，7株来源于痤疮患者），在NCBI上选取痤疮丙酸杆菌标准株(DSM16379,NR040847.1)与颗粒丙酸杆菌标准株（DSM20700,NR025276.1）一起做phylogenetic tree和sequence distances后发现来自PMH皮损区的菌株为痤疮丙酸杆菌，与痤疮丙酸杆菌标准株相似度均大于99.7%。 4.痤疮丙酸杆菌对HaCat细胞分泌细胞因子的影响 PMH分离的痤疮丙酸杆菌与HaCat株共培养分泌的IFN-γ、IL-6量较空白对照组含量升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；较标准菌株NCTC737组含量升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；较痤疮患者分离出的痤疮丙酸杆菌株含量升高，，差异有统计学意义（P＜0.05） PMH分离的痤疮丙酸杆菌与HaCat株共培养分泌的TNF-α量较空白对照组含量降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；较标准菌株NCTC737组含量降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；较痤疮患者分离出的痤疮丙酸杆菌株升高，差异无统计学差异（t=1.47,P＞0.05） 结论： 进行性斑状色素减少症皮损区可以分离自痤疮丙酸杆菌，而周围正常皮肤及正常人的正常皮肤未能培养出痤疮丙酸杆菌；P.anes致PMH患者色素减退，可能是由于影响角质形成细胞分泌如IFN γ、 IL-6等细胞因子，从而影响黑素细胞的生物学活性，影响黑素合成而导致
[Abstract]:......
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R758.733

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本文编号：1624738