阿魏酸对UVA致人成纤维细胞光老化的抑制作用研究
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《苏州大学》 2015年
阿魏酸对UVA致人成纤维细胞光老化的抑制作用研究
陆一枫
【摘要】:研究背景和目的:皮肤衰老包括内源性自然衰老和受环境因素影响的外源性衰老,后者主要是由于紫外线辐射所致称光老化。长波紫外线(UVA,320~400nm)是产生皮肤光老化的主要因素。UVA主要作用于真皮中的成纤维细胞。光老化时皮肤组织结构、含水量、光滑度、弹性和顺应性均下降。组织学表现为表皮有厚度变化如萎缩或增生,并伴有真皮细胞及基质的改变。皮肤的老化影响美观,引起患者生活质量的下降,随着环境污染的日益加重,如何预防和延缓皮肤老化是关注和研究的热点。研究发现,转化生长因子(TGF)-β是一大类多功能的细胞生长增殖调节蛋白,对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用,其中TGF-β1可刺激成纤维细胞增殖,促进细胞外基质(ECM)如胶原蛋白的表达和抑制ECM的降解。基质金属蛋白酶-1(MMP-1)可以降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅹ型结缔组织胶原,导致胶原变性,破坏ECM的正常结构和生理功能。金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)是MMPs的主要内源性抑制物,其中TIMP-1与活化的MMP-1非共价结合抑制MMP-1的活性。此外,p66Shc是调控细胞应激反应和ROS产生的重要基因,参与了氧化应激和细胞衰老相关信号通路。故TGF-β1、MMP-1、TIMP-1、p66Shc在皮肤光老化的发生和发展过程中都起着重要作用。由于药效明确及较少的副作用,从天然植物和传统药物中提取的新型防光药物受到越来越多的重视。阿魏酸(Ferulic Acid)存在于川芎、当归等活血化瘀中药材中。阿魏酸具有抗血栓形成、消炎止痛及很强的抗氧化、清除自由基以及细胞保护作用。既往我们已对阿魏酸的抗紫外线作用进行了初步研究,发现它能够有效抑制长波紫外线(UVA,320~400nm)和中波紫外线(UVB,290~320nm)对人皮肤细胞(包括角质形成细胞和成纤维细胞)的氧化损伤,提高细胞氧化防御能力。然而,阿魏酸是否也可以减轻UVA辐射所引起的光老化?故我们在本研究中采用UVA辐射以及阿魏酸预孵育作用于人皮肤成纤维细胞,观察UVA致细胞老化效应和阿魏酸干预对此过程的影响,以探讨其作用机制。方法:分离培养人原代成纤维细胞,分为空白组、阿魏酸组、UVA组和UVA+阿魏酸组。以UVA照射细胞,照光剂量为10J/cm2,其中药物干预组于照光前后加入200μg/mL阿魏酸孵育。照光后于不同时间段收集细胞进行检测。1.组织化学染色法检测衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)表达。2.酶联免疫吸附法检测上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)含量。3.实时定量PCR(real-time PCR)法检测基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-l(tissue inhibitor of metalloproteinase-l,TIMP-1)和p66shcmRNA表达水平变化。结果:1.正常细胞组及单纯阿魏酸组β-半乳糖苷酶阳性细胞均较低,UVA组β-半乳糖苷酶阳性细胞数则显著升高,加入阿魏酸处理可使β-半乳糖苷酶阳性细胞比率明显降低。2.单纯阿魏酸处理可以促进TGF-β1分泌;UVA照射使TGF-β1分泌量明显降低,加入阿魏酸干预可增加TGF-β1分泌量。3.UVA能够诱导MMP-1、TIMP-1和p66ShcmRNA表达水平升高,而阿魏酸可在一定程度上抑制MMP-1和p66ShcmRNA表达,并诱导TIMP-1mRNA表达。结论:阿魏酸能够延缓UVA辐射引起的皮肤成纤维细胞的损伤老化过程,其机制可能与抑制胶原降解、抗氧化应激相关。
【关键词】:
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R751
【目录】:
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