XPD基因的克隆及其在恶性黑素瘤细胞中的表达

发布时间：2016-11-25 19:16

  本文关键词：XPD基因的克隆及其在恶性黑素瘤细胞中的表达，由笔耕文化传播整理发布。

《大连医科大学》 2012年

XPD基因的克隆及其在恶性黑素瘤细胞中的表达

王月  

【摘要】：背景： XPD是核酸切除修复过程的主要蛋白，因此XPD与肿瘤的关系越来越受到研究者的重视。因此XPD与肿瘤的关系越来越受到研究者的重视。对皮肤恶性黑素瘤基因易感性分子机制的研究表明XPD是皮肤恶性黑素瘤易感的生物标志。DNA修复酶的调控，是预防肿瘤和治疗的关键，HIF-1在参与调控XPD修复中起着重要作用，增加了HIF1和sp1他们重叠的结合位点之间的竞争，紫外线诱导的磷酸化增强了HIF-1蛋白直接结果，而XPD基因启动子取悦的HRE，在编码DNA修复蛋白的基因中，是DNA修复机制的一个关键调节机制。在XPD基因中的DNA修复因子TFIIH存在亚基突变。许多人着色性干皮病患者的致病与XPD点突变R683W有着某种关联。然而，有明显的异质性，有研究对XPD基因中的TFIIH酶功能的突变的效果发现，每一个突变，表现出独特的生化属性。XPD751密码子的Gln/Gln基因型是男性恶性黑素瘤高风险的有意义基因标志，Lys/Gln基因型对预测恶性黑素瘤恶化有重要意义。在本实验中，，我们克隆了XPD，构建了pEGFP-N1/XPD及pcDNA3.1(+)/XPD重组表达质粒，并转染至人恶性黑素瘤细胞，观察它们的表达情况及其在恶性黑素瘤细胞内定位，利用MTT检测细胞的增殖力，以讨论XPD对恶性黑素瘤细胞的生物学影响及其可能的功能。 目的：克隆XPD基因并探讨其在恶性黑素瘤细胞内的定位及其功能。 方法：克隆出人全长XPD cDNA，将该基因构建入pEGFP-N1/XPD质粒，利用脂质体法转染pEGFP-N1/XPD及pcDNA3.1(+)/XPD至人恶性黑素瘤A375细胞，检测XPD蛋白的表达，然后利用GM130和KDEL进行染色，观察基因XPD的细胞定位。细胞增殖力检测使用MTT法。 结果：1.培养Hela细胞并进行RNA逆转录，PCR克隆了人全长XPD cDNA，电泳在约1234bp处见条带。2.将XPD基因连入PEGFP载体并测序鉴定，测序结果与GenBank中人XPD进行比对，结果一致。4. XPD在转染细胞中的高表达。5. PEGFP/XPD重组质粒定位于A375细胞内质网中。6.与转染pcDNA3.1(+)组和空白对照组相比，转染pcDNA3.1(+)/XPD组恶性黑素瘤A375细胞数较少，XPDA375细胞的生长被XPD基因抑制。 结论：1.从Hela细胞中成功克隆出同源盒基因XPD。2.构建pEGFP-N1/XPD质粒。3.用免疫荧光染色证实XPD基因定位于恶性黑素瘤A375细胞的内质网中。4. A375细胞的生长被XPD基因抑制。

【关键词】：
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.5
【目录】：

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