皮肤鳞状细胞癌与相关的原癌基因及抑癌基因甲基化关系的研究

发布时间：2018-10-16 18:43

【摘要】：目的检测皮肤鳞癌及正常皮肤组织中抑癌基因P14ARF、E-cad启动子区甲基化情况，并与原癌基因c-jun、c-fos甲基化情况作比较分析这些基因在肿瘤发生过程中的协同作用。方法利用甲基化特异性PCR（MSP）检测30例皮肤鳞癌患者P14ARF、E-cad基因启动子区甲基化情况，并与20例正常人皮肤组织中P14ARF、E-cad基因甲基化情况作比较，分析在鳞癌患者和正常人之间P14ARF和E-cad基因的甲基化状态的区别。结果（1）皮肤鳞癌组织中，P14ARF和E-cad基因启动子区甲基化发生率分别为60%和36.7%明显高于正常组织5.0%和10%（P0.05）。（2）皮肤鳞癌组织中，c-fos和c-jun基因启动子区的去甲基化程度分别为73.3%、83.3%显著高于正常组织（30%）、（5%）（P0.05）。结论皮肤鳞癌的发生可能与抑癌基因P14ARF和E-cad启动子区高甲基化进而导致基因失活有密切的关系；原癌基因c-jun和c-fos启动子区的低甲基化与鳞癌的发生也有一定的联系。抑癌基因高甲基化与原癌基因低甲基化可能联合起来共同导致肿瘤的发生。实验设计思路在经过了半个多世纪的研究后，人们认识到基因突变和表观遗传的因素综合起来才能导致肿瘤的发生。通过在分子水平上对肿瘤组织和对应的正常组织相比较，可以发现DNA甲基化状态的变化与其他基因的变化是普遍存在的现象。事实上，在几乎所有肿瘤中都能找到相关基因的异常甲基化状态。由此可知DNA甲基化的改变在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色。 DNA甲基化（DNA methylation）是比较常见的表观遗传学现象，它是指在DNA甲基转移酶（DNMTs）的作用下，将甲基直接添加到DNA分子中的碱基上。常见的DNA甲基化发生在DNA双链上的胞嘧啶的第5位碳原子上，通过共价键结合后形成5甲基胞嘧啶（5mC）。在结构基因的5’端存在着以成簇串联的形式排列的CpG二联核苷酸，甲基化经常发生在这些CpG二联核苷序列上。甲基化的结果导致基因表达的沉默。肿瘤组织中普遍存在的低甲基化和局部的高甲基化现象，其分子机制还不是十分清楚，但可以明确的是DNA甲基化异常与肿瘤的发生发展有着十分重要的联系。皮肤鳞癌是常见的皮肤肿瘤，该病的病因目前尚不完全清楚。DNA甲基化理论为鳞癌的研究带来了更加宽广的领域，及全新的视角。我们通过对相关的抑癌基因P14ARF、E-cad及原癌基因c-fos、c-jun启动子和外显子区的甲基化研究，发现抑癌基因高甲基化导致基因的沉默和原癌基因的低甲基化导致的基因活化，在肿瘤的发生发展中起着联合作用。因此，为了明确哪些原癌及抑癌基因在鳞癌的发生发展过程中起着关键的作用，以及拟建一种高效微创的皮肤鳞癌诊断方法，我们通过甲基化特异性PCR（MSP）对与鳞癌相关的4种基因p14ARF、E-cad、c-jun和c-fos进行了全面的甲基化状态检测，以便明确皮肤鳞癌p14ARF、E-cad、c-jun和c-fos基因启动子及外显子的甲基化是否可以成为皮肤鳞癌的特异性甲基化片段标志物，为肿瘤的早期诊断、判断预后和治疗思路提供坚实的理论基础。对来源于临床的30例皮肤鳞癌患者的癌组织和20例正常人的皮肤组织进行了原癌基因和抑癌基因启动子区的DNA甲基化分析。通过甲基化特异性PCR（MSP）实验，对抑癌基因P14ARF、E-cad和原癌基因c-fos、c-jun启动子区的甲基化状态进行定性检测。本论文共分成三部分，第一部分是论文的第1章，设立正常对照组织与皮肤鳞癌进行比对，通过MSP检测抑癌基因P14ARF，E-cad启动序列高甲基化状态，以及对皮肤鳞癌发生的影响。第二部分是论文的第2章，设立正常组织对照与皮肤鳞癌进行比较，通过MSP法检测原癌基因c-jun和c-fos启动子及外显子区低甲基化与鳞癌发生的联系。论文的第3部分是一篇综述，即抑癌基因与原癌基因甲基化异常对肿瘤发生发展的影响，，及临床应用价值。
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【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.5

【共引文献】