几种化合物对THP-1细胞TLR-4信号传导通路相关因子的影响

发布时间：2018-11-19 19:20

【摘要】： 银屑病等炎症性皮肤病是一组与免疫紊乱密切相关的疾病,多种免疫细胞和细胞因子共同参与了炎症性皮肤病的发病过程。细胞因子复杂的网络系统以及相互调控机制均提示单一治疗靶点的药物已不适合此类疾病的治疗,目前多靶点药物在炎症性皮肤病治疗方面的研究日益成为重点。 TLR-4是Toll样受体家族的重要成员,近来研究证实TLR-4与银屑病中天然免疫紊乱的现象相关联,树突状细胞以及巨噬细胞在银屑病炎症反应过程中起到重要的调节作用。以树突状细胞及巨噬细胞作为银屑病治疗靶点的前景也越来越明朗。THP-1细胞是利用白血病患者血液中的单核细胞建立的细胞株,能够分泌炎性细胞因子,并且经诱导后可转变为巨噬细胞。THP-1细胞是体外研究人单核-巨噬细胞功能的良好替代细胞,已在相关研究中广泛使用。研究相关化合物对单核细胞TLR-4信号传导通路的干预作用,对银屑病等炎症性皮肤病的治疗及探究其抗炎-免疫机理具有一定意义。姜黄素是姜黄的主要活性成分,其药理作用广、毒性低具有广阔的药用前景姜黄素的多种药理活性提示其具有作为治疗银屑病等炎症性皮肤病药物的潜力；盐酸13-己基小檗碱(HB-13)和盐酸13-己基巴马汀(HP-13)是具有显著抗炎作用的化合物,先前实验已经证实：HB-13和HP-13对角质形成细胞中INF-y信号转导途径的多个环节有明显抑制作用。本研究以人单核细胞株THP-1细胞为靶细胞,探究姜黄素、HB-13和HP-13三个化合物对人单核-巨噬细胞TLR-4信号转导通路中相关信号分子及其下游因子表达的干预作用。第一章化合物对小鼠非特异性炎症反应的影响采用佛波酯(TPA)致小鼠鼠耳肿胀非特异急性炎症模型,检测姜黄素、HB-13、HP-13局部外用给药和系统给药的体内抗炎活性。结果显示：小鼠腹腔注射姜黄素(100mg/kg),HB-13(10mg/kg),HP-13(20mg/kg)对小鼠未产生无明显毒性反应。局部外用姜黄素(0.30 mg)、HB-13(0.38 mg)、HP-13(0.36 mg),以及腹腔注射姜黄素(50、100mg/kg)、HB-13(5、10mg/kg)、HP-13(10、20mg/kg)对TPA诱导的小鼠鼠耳肿胀急性炎症反应有明显的抑制作用,抑制率均达到50%以上。本章结果表明：无论局部外用或系统给予一定剂量的姜黄素、HB-13和HP-13均能产生明显的抗炎作用。第二章化合物对THP-1细胞TLR-4信号传导通路中信号分子表达的影响通过体外培养的THP-1细胞,用外源性LPS作为刺激剂,用RT-PCR法检测LPS刺激THP-1细胞后TLR-4信号传导通路中IRAK1、TRAF6、NF-κB、TNF-α、IL-1p等信号分子mRNA表达情况,同时研究化合物对LPS刺激THP-1细胞后上述目的基因mRNA表达的影响。结果显示：1μg/mL LPS处理THP-1细胞4小时后,可明显上调TRAF6、IRAK1、NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达。药物影响试验结果表明,姜黄素(25、50μg/ml)、HB-13 (0.39、0.78μg/ml)和HP-13(1.56、3.12μg/ml)可以明显抑制LPS诱导的上述目的基因mRNA的高表达,抑制率可达到90%以上。本章结果表明：1μg/ml LPS处理THP-1细胞4小时可形成TLR-4信号通路相关信号蛋白的体外诱导高表达模式,姜黄素、HB-13、HP-13均可干预THP-1细胞TLR-4通路中IRAK1和TRAF6基因的转录,进而下调下游NF-κB mRNA的表达,最终影响下游细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA的表达。第三章化合物对THP-1细胞TLR-4信号传导通路下游分子表达的影响 ELISA法测定化合物对LPS刺激THP-1细胞后TNF-α、IL-8、IL-1β分泌的影响。结果显示：未经刺激的THP-1细胞低水平表达TNF-α、IL-8、IL-1β,1μg/mL LPS刺激24h后,TNF-α、IL-8、IL-1β的表达显著上升。姜黄素、HB-13和HP-13均能明显抑制LPS刺激引起的TNF-α、IL-8和IL-1β的表达(P0.05,P0.01),IC50值约为：TNF-α：姜黄素：30.4671μg/mL, HB-13:0.2924μg/mL, HP-13:2.0182μg/mL; IL-8:姜黄素：19.0561μg/mL, HB-13:0.5132μg/mL, HP-13:1.7766μg/mL; IL-1β:姜黄素：32.9003μg/mL, HB-13:0.4547μg/mL, HP-13:2.3403μg/mL。本章结果表明：用1μg/mLLPS刺激24h可使THP-1细胞中TNF-α、IL-8、IL-1β表达提高,姜黄素、HB-13和HP-13对THP-1单核细胞TLR-4信号传导通路中下游控制的炎症因子的蛋白表达有明显的干预功能。
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【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R758.63

【参考文献】