粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）在正常人黑素细胞及黑素瘤细胞株中的表达和rhG-CSF对人黑素细胞生物学作用的研究

发布时间：2019-04-23 07:06

【摘要】：目的探讨粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)在正常人黑素细胞中的表达及重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对人黑素细胞生物学作用的影响。方法分别用普通的合成培养基与添加一定浓度rhG-CSF的合成培养基培养正常人的黑素细胞，并对黑素细胞的生长情况及形态进行观察。应用流式细胞术检测人黑素细胞、中性粒细胞及红白血病细胞(HEL92.1.7)中G-CSFR的表达率；免疫荧光染色检测G-CSFR在细胞中的定位；蛋白印迹(Western-Blotting)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测黑素细胞、中性粒细胞及HEL92.1.7中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表达情况；噻唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度rhG-CSF(200、400、600、800μg/L)对黑素细胞增殖作用；多巴氧化法检测黑素细胞的酪氨酸酶活性。结果1.黑素细胞G-CSFR的表达率(76.81±10.70%)较HEL92.1.7细胞(2.53±1.54%)明显升高(P0.01)，略低于中性粒细胞(85.76±15.71%)(P0.05)；2.G-CSFR在中性粒细胞、黑素细胞中呈阳性染色，在HEL92.1.7细胞中为阴性染色，阳性反应主要定位在细胞浆及细胞膜；3.人黑素细胞可表达G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA，其表达水平与rhG-CSF无关(P㧐0.05)；黑素细胞G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA的表达水平明显高于HEL92.1.7(P0.01)，低于中性粒细胞(P0.05或P0.01)；4.200～800μg/L的rhG-CSF具有促进人黑素细胞增殖的能力，其中600μg/L的rhG-CSF效应最强(164.04±13.0%)；200～800μg/L的rhG-CSF对黑素细胞的酪氨酸酶活性无影响(P㧐0.05)。结论正常人黑素细胞可表达G-CSFR；G-CSFR阳性反应主要定位在细胞浆及细胞膜。rhG-CSF具有促进人黑素细胞增殖的作用，但对酪氨酸酶活性无影响。目的探讨G-CSF及其受体在人黑素瘤细胞株中的表达及临床意义。方法应用流式细胞术检测人黑素瘤细胞株(M14、A375)、人白血病细胞株(U937)及红白血病细胞(HEL92.1.7)中G-CSFR的表达率；免疫荧光染色检测G-CSFR在细胞中的定位；蛋白印迹(Western-Blotting)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测M14、A375、U937、HEL92.1.7细胞中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表达情况；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测M14、A375细胞中G-CSF的分泌水平。结果1. M14细胞的G-CSFR表达率为(80.13±10.12%)，明显高于HEL92.1.7细胞(2.69±1.74%)(P0.01)，略低于U937细胞(84.05±7.36%)(P0.05)；A375细胞的G-CSFR表达率为(56.29±7.38%)，高于HEL92.1.7细胞(P0.01)，但低于U937细胞(P0.05)和M14细胞(P0.05)。2. G-CSFR在U937、M14和A375细胞中均呈阳性染色，在HEL92.1.7细胞中为阴性染色，阳性反应主要定位在细胞浆及细胞膜。3.G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA在M14细胞中有表达，其表达水平明显高于HEL92.1.7(P0.01)，，略低于U937细胞(P0.05)；G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA在A375细胞中的表达水平低于U937细胞(P0.05)和M14细胞(P0.05)，高于HEL92.1.7细胞(P0.01)。4. M14细胞呈时间依赖性分泌G-CSF，A375细胞未检测到G-CSF的分泌。结论人黑素瘤细胞株M14和A375均表达G-CSFR。G-CSFR阳性反应主要定位在细胞浆及细胞膜。M14细胞可分泌G-CSF，A375细胞不能分泌G-CSF。M14细胞中可能存在G-CSF/G-CSFR自分泌环路。
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【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.5

【引证文献】