UNC5B单克隆抗体的制备及对黑素瘤细胞体外迁移能力的影响

发布时间：2019-05-24 22:27

【摘要】：目的制备非协调性分子5同源蛋白B(UNC5B)的单克隆抗体(mAb),分析其功能。方法将UNC5B基因片段与原核表达载体pET-32a连接,连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3),进行原核诱导表达并纯化重组蛋白。用UNC5B重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选可稳定分泌抗UNC5B的杂交瘤细胞株,并用Western blot法、ELISA和流式细胞术鉴定。利用细胞划痕实验观察UNC5BmAb对黑素瘤细胞迁移能力的影响。结果表达并纯化了UNC5B重组蛋白;筛选出1株高效价的2C9mAb,通过ELISA、Western blot法和流式细胞术证实该m Ab特异性识别UNC5B;划痕实验证明在netrin-1存在的条件下,UNC5BmAb可促进黑素瘤细胞迁移。结论成功制备了UNC5B的特异性m Ab,在netrin-1存在时,该抗体可促进黑素瘤细胞迁移。
[Abstract]:Objective to prepare monoclonal antibody (mAb), to analyze the function of discordant molecule 5 homologous protein B (UNC5B). Methods the UNC5B gene fragment was ligated with prokaryotic expression vector pET-32a, and the ligated product was transformed into E. coli BL21 (DE3). The recombinant protein was induced and purified. BALB/c mice were immunized with UNC5B recombinant protein. Hybridoma cell lines stably secreting anti-UNC5B were screened by hybridoma technique and identified by Western blot assay, ELISA and flow cytometry. The effect of UNC5BmAb on the migration ability of melanoma cells was observed by cell scratch test. Results the recombinant protein of UNC5B was expressed and purified, and a high valence 2C9mAbstrain was screened out. The specific recognition of UNC5B; by mAb was confirmed by ELISA,Western blot and flow cytometry. Scratch test showed that UNC5BmAb could promote the migration of melanoma cells in the presence of netrin-1. Conclusion the specific m Ab, of UNC5B can promote the migration of melanoma cells in the presence of netrin-1.
【作者单位】： 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室;苏州大学唐仲英血液学研究中心;
【基金】：国家自然科学基金(81270593)
【分类号】：R739.5

【共引文献】

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本文编号：2485237