黑色素瘤干细胞疫苗抗肿瘤效应及其机制初探
发布时间：2019-09-20 06:55
【摘要】：研究背景:恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是一种全世界发病率越来越高的侵袭性肿瘤,占皮肤恶性肿瘤的7%～20%,其恶性程度高,易转移、复发及分泌转化生长因子(transforming growth factor-beta,TGF-p)等抑制性因子,因此一旦转移即难以根治。近年在卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、骨髓瘤及黑色素瘤等多种肿瘤的研究中证实有肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)或癌干细胞(cancer stem cell,CSC)存在,并认为CSC是肿瘤拮抗放化疗、复发和转移的根源。因此,从理论上分析,消灭CSC即能控制肿瘤复发和转移,消除其耐药性和对化疗的拮抗。传统的手术治疗、放疗、化疗因不能靶向CSC而致使患者治疗后五年生存率不甚理想,由此可见寻找新的治疗策略非常重要。肿瘤免疫治疗是通过激活体内的免疫系统产生针对肿瘤有效遏制的临床治疗手段,因其能诱导靶向肿瘤细胞的多种免疫效应机制而发挥抗肿瘤效应。多种免疫治疗手段的有效性已在临床前期实验和临床治疗中得到证实,如淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞、天然杀伤(NK)细胞、T细胞、树突状细胞、细胞因子治疗和抗体治疗等。其中肿瘤的治疗性疫苗也取得了可喜的进展,但由于肿瘤抗原免疫原性弱、肿瘤免疫逃逸、肿瘤的异质性等原因,疫苗的实际疗效与预期仍有差距,因而寻找肿瘤疫苗研制新的突破点尤为重要。目前有观点认为CSC可能富聚多种肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原,CSC疫苗可能会激发宿主免疫系统产生靶向CSC的免疫反应,所以黑色素瘤CSC疫苗是一个值得研究的免疫治疗策略。研究目的:探讨表达黑色素瘤B16F10 CD133+CD44+CSCs瘤苗治疗黑色素瘤的效应及其机制。研究方法:利用免疫磁珠分选技术分离出B16F10CD133+CD44+CSCs,取5x105个细胞经MMC灭活后免疫C57BL/6小鼠,每次间隔10天,共免疫三次。末次免疫后10天,以1x105个B16F10野生株细胞攻击免疫鼠。同时设B16F10非癌干细胞组和B16F10野生株组为对照,以上述同样方法免疫和攻击小鼠。观察各组小鼠肿瘤生长情况、生存时间,并检测免疫小鼠血清细胞因子TGF-p、IFN-γ和IL-4的表达水平、脾细胞和NK细胞毒活性。同时以QPCR法和Western-Bolt法检测了分离的B16F10 CD133+CD44+CSCsCB1B1101癌干细胞、B16F10野生株以及小鼠体内移植瘤组织中NY-ESO-1、PD-1和WISP-2等相关蛋白的表达水平。研究结果:1.B16F10CD133+CD44+CSCs瘤苗免疫组的小鼠成瘤率,肿瘤体积,肿瘤生长速度均较普通瘤苗组低,差异有统计学意义。2.B16F10 CD133+CD44+CSCs瘤苗免疫组小鼠血清的IFN-y和脾NK细胞毒和脾细胞毒活性均较对照组瘤苗高,同时TGF-p水平降低、IFN-γ水平上升并且IFN-γ/IL-4比值升高。3.QPCR分析相关蛋白的DNA水平显示,B16F10 CD133+CD44+ CSCs中NY-ESO-1和PD-1高表达,WISP-2低表达。4.Western-bolt分析B16F10 CD133+CD44+CSCs瘤苗免疫组小鼠肿瘤组织中NY-ESO-1和PD-1均低表达,而WISP-2蛋白却是高表达。结论:本研究制备的B16F10CD133+CD44+CSCs瘤苗,能有效的诱导抗B16F10的特异性细胞免疫与体液免疫反应,显示出有效的抗肿瘤效应,其机制可能与通过表达肿瘤相关抗原蛋白而调控信号通路蛋白相关。本研究为CD133+CD44+CSCs瘤苗治疗黑色素瘤提供可供参考的实验和理论依据。
【图文】：
图２双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测瘤苗免疫小鼠后各组Ｆｉｇ．２邋Ｔｈｅ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ｓｅｒｕｍ邋ＩＦＮ－ｙ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ邋ｗｅｒｅ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄＣＳＣｓ：邋ＣＤ邋１３３＋ＣＤ４４＋ＣＳＣｓ瘤苗免疫组；ＷＴ：邋Ｂ１６肿瘤干细胞免疫组。＊户＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。逡逑４．逦Ｂ１６Ｆ１０邋ＣＤ１３３＋ＣＤ４４＋邋ＣＳＣｓ瘤苗免疫鼠ＥＬＩＳＡ检测血清ＴＧＦ－ｐ表达水平差异，结瘤苗、ｎｏｎ－ＣＳＣｓ瘤苗和Ｂ１６Ｆ１０野生株瘤苗有明显的差异，如图３所示。ＣＳＣｓ瘤苗免疫ｎｏｎ－ＣＳＣｓ瘤苗组（Ｐ＜０．０１），与野生株Ｂ１６Ｆ（户＜０＿０５）。逡逑□邋ＣＳＣｓ邋％逦＂逡逑枈邋ＷＴ邋」＊邋＂Ｉ邋＊逦＊＊逡逑■邋Ｎｏｎ－ＣＳＣｓ邋Ｊ邋＊邋－逡逑２．５－｜逡逑２．０－逡逑＿
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本文编号：2538632
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