何首乌水提物对小鼠黑素瘤细胞黑色素生成影响的研究

发布时间：2020-03-21 17:15

【摘要】：随着社会的发展,人们越来越追求自身的健康和完美,拥有黑亮的头发是许多人所渴望的,而白发脱发作为影响外表的最常见的原因之一,往往给患者带来精神上的很大烦恼。据文献记载,传统中药何首乌具有乌须发、延年益寿的功效。黑色素产生于皮肤的黑色素细胞,其生物合成过程需多种酶介导,酪氨酸酶是其中重要的酶,它能够将酪氨酸氧化为多巴(DoPA),进一步氧化成多巴醌(DoPA quinone),在别的酶的催化下氧化聚合成黑色素。 本文以小鼠B16F1黑素瘤细胞为材料,以不同终浓度的何首乌水提取液处理细胞,分别为0mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml。采用MTT法、体外氧化L-多巴反应法、NaOH法分别检测其对细胞增殖、细胞中酪氨酸酶活性、细胞中黑素生成量的影响;采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测其对细胞中酪氨酸酶基因、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-l)基因、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)基因及MITF基因mRNA表达的影响;采用Western blot免疫印迹法检测其对上述四种基因的蛋白质表达的影响。研究发现,何首乌水提取物能够激活B16F1黑素瘤细胞中酪氨酸酶的活性,并增加黑色素的合成量,同时还具有促进黑素细胞增殖的作用。何首乌水提取物可以提高上述黑色素合成相关的四种基因及其蛋白质的表达量。而且,从结果可以看出,在0—1mg/ml的浓度范围内,随着何首乌水提取物浓度增大,细胞增殖、酪氨酸酶的活性和基因表达、蛋白质表达也会随之上调。通过实验我们发现:何首乌水提液促进黑素瘤细胞生成黑素作用的可能机制之一是它能够在基因转录和翻译水平促进黑素合成相关基因mRNA的表达。 本文运用水提法提取何首乌中乌发有效成分,从细胞和分子水平验证何首乌乌发的作用机理。为深入探讨何首乌的促黑素生成功能及更详细的机理、进一步研究何首乌的药理提供了理论基础。为传统中药的现代化功效评价提供了有力的参考证据。
【图文】：

图 1.1 二苯乙烯苷结构式Fig.1.1 Structure of stilbene glycoside根据以往的参考文献得知，二苯乙烯苷具有多种生理活性，，作为抗衰老的非常有研究的价值。日本的 Hata[ 10 ]在 1975 年第一次从何首乌中分离测定出二苯乙烯苷组分。 80 年代开始，国内中医界逐渐对何首乌中这一水溶性组分表示关注。到目二苯乙烯苷主要还是采用萃取、柱层析这样的手段来分离。边秀娟[ 11 ]对 Ha

图 1.2 黑色素的合成机制Fig.1.2 The mechanism of melanin biosynthesis in the melanocyte.1.4.2 黑素生成的调节的相关细胞因子和信号途径在黑素生成过程中，调节黑素合成的速度和黑素种类的因素有很多：体内的多种激素、细胞因子、无机离子及黑素细胞周围环境的物理化学性质改变，它们是共同发挥作用的。而酪氨酸酶则是其中最重要的决定黑色素合成的因素。酪氨酸酶是一种氧化还原酶，它结构复杂且含有铜离子，具多个亚基。TYE 首先催化 L-酪氨酸羟基化生成 L-多巴，然后使 L-多巴氧化生成多巴醌，因此是一种具双重催化作用的酶。多巴醌经一系列反应后，生成由 5,6-二羟吲哚和 5,6-二羟吲哚-羧酸单元一起构成的异聚体-黑色素。酪氨酸酶是黑色素生成的主要限速酶，它的表达和活性对黑素生成的速度和产量有决定作用[ 27,28 ]。新合成的酪氨酸酶是没有催化活性的，它结合上一个-30kD 的蛋白质之后，就变成了一个异源二聚体复合物，加入
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R285.5;R739.5

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本文编号：2593663