同种异体纯培养黑素细胞移植治疗白癜风

发布时间：2020-03-29 01:32

【摘要】： 白癜风是一种常见病，发病率大约1％-2％。主要表现为斑片状或片状皮肤色素脱失变白。病变皮损区中黑素细胞（Melanocyte MC）明显减少甚至缺失。往往给患者带来沉重的心理负担，影响工作、学习、社交等正常活动。病因复杂。治疗比较困难。一般采取内用、外用药相结合、中西医相结合、药物和理疗或其它疗法相结合，目的是刺激皮损部位尚存的MC增殖、迁移或成熟。但是治疗效果常常不理想。许多患者对药物不敏感，有些部位几乎无效。通过自体移植MC 治疗白癜风已经取得了较好的效果。但是这类方法要从自体正常部位通过一些外科手段才能取得MC，而且数量有限，患者痛苦较大，费用和风险较大。如果植入异体MC不被排斥，就会解决MC的来源问题，弥补以上缺陷。基于下面的认识：1．白癜风患者免疫状况特殊； 2．MC一般不表达MHC-Ⅱ类抗原；3．体外纯培养MC的悬液中不含有朗格罕氏细胞（Langhans cell LC）；4．培养的角质形成细胞同种异体移植获得成功，预计同种异体MC在白癜风患者体内很有可能存活。为此，本研究进行了同种异体MC临床试验。在移植前不配型、移植后不使用任何免疫抑制剂的情况下，观察同种异体MC移植后的临床效果，检测异体MC的转归，探索异体MC移植的可行性。至今已经做第四军医大学硕十学位论文了11例临床试验。首例患者，女，27岁，志愿配合同种异体MC移植。移植时处于稳定期。用健康男青年（与患者无血缘关系）环切的包皮体外培养 MC，培养基不含有TPA。把第4代纯培养的MC用胰酶消化后，加入含 20％小牛血清的生理盐水终止，离心洗涤后加入生理盐水，吹打制成不同浓度的细胞悬液备用。用表皮分离机在患者腹部白斑处吸抱 4个。从疮内抽出大部分疮液，再从原针孔处分别注入不同浓度的MC 悬液。A、B处 MC数量为 2勺‘个，C、D处 MC数量分别为 1＼‘ 个和广 10‘个。移植后连续观察色素恢复情况。移植后患者无特殊不适。至30天时移植点发红，有轻微色素沉着。45天后移植点色素加深，周围略发红。75天后4个移植点色素恢复明显，颜色与邻近正常皮肤颜色基本匹配。恢复的色素在移植后 160 天仍然稳定。色素恢复区没有向周围扩散的迹象。D点移植细胞少，色素恢复区面积较小。在C点用表皮分离机吸痞取疮皮，提取DNA，检测 Y染色体特异性片段。结果为阳性。移植 180天后，在 A点做活检，银氨黑素染色显示：MC周围的表皮细胞内明显可见黑素颗粒，以基底层较多；毛囊部位没有黑素颗粒着色；在表皮基底层和棘层之间有M C存在：真皮层有少量淋巴细胞浸润。为了检验患者在首次移植后能否接受再次移植，160天后用吸疙法在腹部原移植部位周围和右骼部白斑处做第二次移植，注入另一个健康供体的第四代 MC悬液，每个疮注人 lxlo‘个 MC，并在右骼部设置两个不加 MC的对照。200天后，腹部、右髓部接受第二次MC 移植的部位有小面积的色素恢复，对照部位无色素沉着。首次移植后恢复的色素仍然稳定存在，没有向周围扩展。在首例移植取得效果半年后，我们又重复做了10例移植，7女3 －3－第四军医大学硕士学位论文男，除一位男性处于活动期外，其他均处于稳定期。所用试剂和移植方法基本同前。注入的异体MC是培养3——5代的MC，注入的细胞数量为 lx10‘一lx10’个／M。3个月后 1位女性二位男性失访。随访到的 6位女性移植点色素较周围白斑区深，其中2例色素恢复明显，基本接近周围正常皮肤。从3位女性色素恢复点取疮皮，提取DNA，从中检测到Y染色体特异性片段，有1例非常明显。l例活动期患者在1 月后开始有色素恢复，3月后恢复色素明显，但是近6月时病情活动，恢复的色素逐渐消失。从临床结果看，首例患者接受异体MC移植的白斑区色素恢复比较满意，基本接近于周围正常皮肤。移植360天后恢复的色素仍稳定存在，有的移植点达到痊愈。重复的7例患者移植后也有一定效果，2 例明显。异体MC可以使白缀风皮损恢复部分颜色，效果确切。在首例患者接受的第二次移植中，异体＊C来自另外一个供体。结果不但没有出现明显的排斥反应或变态反应，而且半年后有小面积的色素恢复。启示白癫风患者有可能接受多次异体细胞移植，，甚至是来自于不同供体的细胞。通过组织病理学检查，色素恢复区有存活的MC，并能分泌黑素颗粒。存活的MC我们推测是移植的异体MC。首先，首例女性患者移植 160天后疮皮 DNA经 PCR检查其中含有 Y染色体特异性片段；三例女性患者在移植3月后也重复到这个结果。而只有来自男性供体的 MC中才有Y染色体特异性片段。其次，首例患者第二次MC移植半年后，腹部和右骸部移植MC的部位有小面积的色素恢复，未注射 MC的对照部位无色素恢复。说明患者皮损区色素恢复不是炎症刺激的结果，而是异体MC存活并发挥作用的结果。第三，如果说首例患 ?
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R758.41

【参考文献】