脂氧素A4通过调控HMGB1在银屑病中的抗炎作用及机制研究

发布时间：2020-03-29 01:42

【摘要】：目的:银屑病是一种慢性炎症性皮肤病,目前还没有完全治愈的策略。脂氧素A4(LXA4)和5(S)-6(R)-7-三羟基庚酸甲酯(BML-111)具有强效的抗炎和促消退特性。高迁移率族蛋白1(HMGB1)作为炎性细胞因子在银屑病患者皮损和外周血中被检测到高表达,可能参与银屑病的发病机制。因此,我们研究LXA4或BML-111对脂多糖(LPS)诱导的角质形成细胞炎症反应和咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病样皮炎中HMGB1信号级联反应和炎症的影响。方法:1.IMQ诱导银屑病样皮炎模型,BALB/c小鼠随机分为三组:(1)IMQ+BML-111组:小鼠接受剂量为1mg/kg/天的BML-111腹腔注射,连续7天应用IMQ乳膏。(2)IMQ组:小鼠给予IMQ处理,同时接受与IMQ+BML-111组相同体积的生理盐水腹腔注射。(3)正常组:小鼠腹腔注射生理盐水,背部皮肤外用凡士林。2.为了评估小鼠背部皮损炎症程度,一项基于临床银屑病面积和严重程度指数(PASI)的客观评分系统被应用。3.免疫荧光、Western blot、q RT-PCR共同检测小鼠皮损组织中HMGB1的表达量。4.应用Western blot和q RT-PCR从蛋白和m RNA水平上检测皮肤中HMGB1下游受体(晚期糖基化终产物受体(RAGE)和toll样受体4(TLR4))及其信号通路的表达和激活。5.q RT-PCR从m RNA水平上显示皮损中炎性细胞因子(IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-17a、IL-17c、IL-23和IL-22)的表达量。采用ELISA的方法检测小鼠外周血血清中炎症因子(IL-1β、TNF-α、IL-17和IL-23)的表达水平。6.角质形成细胞分为四组:(1)NC组:正常培养;(2)LXA4组:仅给予LXA4刺激;(3)LPS组:仅给予LPS刺激;(4)LXA4+LPS组:LXA4预处理30分钟后给予LPS刺激。7.Western blot检测角质形成细胞胞浆和胞核中HMGB1的表达量;q RT-PCR评估角质形成细胞中HMGB1的表达水平;ELISA法测定角质形成细胞处理24小时后培养上清中HMGB1的浓度;Co-IP检测细胞中HMGB1乙酰化修饰水平。8.Western blot和q RT-PCR检测角质形成细胞中RAGE和TLR4及其信号通路(p-ERK1/2和NF-κB p65)的活化情况。结果:在体内实验中,我们发现用BML-111干预可明显减轻IMQ诱导的银屑病样皮炎的形态学和组织学变化;抑制皮损组织中HMGB1从细胞核向细胞质的转位和表达;下调HMGB1受体TLR4和RAGE及其下游信号通路p-ERK1/2和NF-κB p65;显著抑制IMQ诱导的皮损组织中促炎性细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17a、IL-17c、IL-23和IL-22)m RNA表达增高效应,可轻度降低IFN-γ的表达,但该差异无统计学意义;IMQ组小鼠外周血血清中高表达促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-17和IL-23,BML-111干预可明显降低TNF-α、IL-17和IL-23的表达水平。在体外实验中,我们的研究显示LXA4抑制HMGB1在LPS诱导的角质形成细胞中的转位和表达,且这种抑制效应可能通过影响HMGB1的乙酰化修饰水平。LXA4对角质形成细胞中HMGB1/RAGE和HMGB1/TLR4信号通路均有抑制效应。结论:我们的研究结果提示LXA4及其类似物可能是银屑病的潜在治疗介质,其机制可能通过调节HMGB1的转位和表达。
【图文】：

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动物实验方案示意图

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41图 2：BML-111 改善 IMQ 诱导的小鼠银屑病样皮炎的形态学改变。（A）连续给药 8 天后小鼠的背部皮肤代表性宏观视图。（B）每天评估背部皮肤的红斑、鳞屑和增厚表现; 通过这三个独立的指标计算临床 PASI 评分（分值范围从 0 到12）。数据以均数±标准差表示（n = 8）。**P<0.01 和*P<0.05 为与 IMQ 组小鼠相比。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R758.63

【参考文献】