淋病奈瑟氏菌中国流行株gyrA、praC和mtrR-CDE基因与耐药性形成的关系

发布时间：2020-04-25 18:25

【摘要】： 从1993～2001年，在我国的西安、湛江和长春三个地区共收集604株淋病奈瑟氏菌(NG)，对耐药性表型、质粒谱表型、营养型、PEN／TET耐药表型以及β-内酰胺酶表型进行了流行病学研究。用琼脂稀释法测定了其对8种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。通过质粒抽提和琼脂糖凝胶电泳确定NG耐药株的质粒谱，并用PCR方法鉴定了部分耐药株。使用直线相关与回归分析、t检验和χ~2检验进行耐药相关性分析。结果显示，全部604株中，产青霉素酶淋球菌(PPNG)有6株(1.0％)；116(19.2％)属于产青霉素酶-质粒介导四环素耐药淋球菌(PP／TRNG)；168株(27.8％)为质粒介导四环素耐药株(TRNG)。三种喹诺酮类药物中，环丙沙星(CIP)耐药率最低，62％(417／604)菌株对其敏感；13.2％(80／604)的NG对壮观霉素(SPE0耐药；13.4％(81／604)的分离株出现了对头孢三嗪(CRO)的敏感性降低，2.2％(13／604)表现完全耐药。耐药性最小抑菌浓度(MIC)相关性分析表明，CIP和氧氟沙星(OFL)、诺氟沙星(NOR)耐药性呈正相关P＜0.05；非PPNG株，青第四军医大学博士学位论文霉素（＊＊N）和四环素（拈T）呈负相关P＜O．0卜阿奇霉素（A二1）与＊RO呈负相关P＜队05。不同地区耐药性分析表明，我国湛江地区对喳诺酮类的敏感性明显底于西安和长春地区（P＜0．05）；西安地区分离的菌株对TET和AZI的耐药性检出率高于长春和湛江地区；对其他药物的敏感性则没有显著性差异。我们还分析了质粒谱表型、营养型、PEN／TET 耐药表型以及p－内酞胺酶表型与耐药性的关系。我们认为过去曾广泛使用的某些抗生素己经不再适用于淋病的治疗：临床常用的头抱曲松、钟E 及AZI的耐药株的出应引起重视。为了探讨DNA螺旋酶A亚单位基因（gyTA）和拓扑异构酶IVA亚单位基因中raC）与喳诺酮耐药性形成的关系，，我们筛选出76株对CIP 高水平耐药的 QMG株，通过 PCR扩增了其中的 18株 NG的 gyTA和 praC基因喳诺酮耐药决定区（QRDR人并对扩增子直接测序。通过Whel 酶切、脉冲电场凝胶电泳（PFEG）分析了这些菌株的遗传关系。结果表明，对照组中的 18株敏感菌只有两株发生了 gyTA的单一突变，未发现 praC变异。而耐药组中 89％门）菌株的 gytA发生了 Ser习－Phe 的单一突变株和／或praC的双突变。88．9％门5）的菌株的gyTA发生了 Ser习—Phe和 Asp95—Gly的突变。在发生 praC突变中 72％属于 Asp86—Asn突变丁FEG分析发现10株具有完全一致的gyTA和PraC 突变模式。同时也发现来自不同地区的菌株的PFEG指纹图是不同的。这个研究表明，NG中国流行株对喳诺酮产生耐药性与gpA和praC基因的单一或双重突变有着密切的关系。 NG对红霉素和 Triton X－100的抗性，是由多重传递耐药性调控基因（mtrR）基因介导的、多重耐药基因复合体（m汀CDE）编码的外排泵的过表达有关htrR编码可调节m汀CDE操纵子表达的转录抑制剂）。 6 第四军医大学博土学位论文我们为了确定临床分离株对AZI敏感性的降低是否与mtrR的变异有关。我们选择了 4株AZI耐药的NG株，提取染色体DNA，PCR扩增 mtrR 基因，在此基础上进行序列分析。结果我们发现在被检菌3株NG在 mtrR 45位氨基酸出现甘氨酸一天冬氨酸置换和 mtrR启动子中 13hp 反向重复序列内有一个单碱基缺失，成功地把其中的1株染色体DNA 转化到野生型标准株，使后者出现mtrR启动子突变，同时其阿奇霉素敏感性降低了9倍；l株在mtrR启动子中，含有一个迄今为止尚未描述过的突变，这个突变表现为在13hp反向重复序列内有一个双核昔酸的插入（TT）。通过转化实验的方法成功地造成mud基因的插入突变，致使 mrtDE转录失活，转化子对 AZI的敏感性提高了 10倍。由此我们认为，mdDE转录阻遏物的基因（mrR）的转录失活的突变或抑制编码基因失去功能的突变，可导致NG过度表达mndDE外排泵，从而增加其泵出HAs的能力。这些疏水性试剂包括染料（如结晶紫），清洁剂（如 Tition X．100）和药物（如红霉素和 AZI）我们认为，mtheDE编码的外排泵可识别AZI，对AZI敏感性降低的原因，至少有一部分可以被 mtrR的变异解释。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R759.2

【参考文献】