青蒿琥酯对人皮肤增生性瘢痕上皮细胞增殖及TGF-β1、ITGB1、MMP-1表达的影响

发布时间：2017-03-24 01:05

  本文关键词：青蒿琥酯对人皮肤增生性瘢痕上皮细胞增殖及TGF-β1、ITGB1、MMP-1表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：检测青蒿琥酉(artesunate, ART)对体外培养的人皮肤增生性瘢痕上皮细胞增殖及转化生长因子β1 (transforming growth factor-betal, TGF-β1)、整合素p1(mtegrin β1,ITGB1)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloprotein-1, MMP-1)表达的影响,探讨ART对瘢痕上皮细胞的影响。方法：1.收集行手术切除的皮肤增生性瘢痕组织,通过中性蛋白酶消化法揭取人皮肤增生性瘢痕表皮,胰酶消化成单个细胞后接种于细胞培养瓶内,倒置相差显微镜观察细胞生长情况。利用胰酶消化时间差,去除成纤维细胞后获得纯度较高的上皮细胞细胞。镜下观察细胞形态,采用抗细胞角蛋白及波形蛋白抗体免疫组化染色对所培养的细胞进行细胞来源鉴定。将分离纯化获得的瘢痕上皮细胞进行后续试验。2.MTT实验检测青蒿琥酯干预24 h后对人皮肤增生性瘢痕上皮细胞增殖的影响。同时用倒置显微镜观察青蒿琥酯作用后细胞形态的变化。3.荧光定量RT-PCR法检测不同浓度青蒿琥酯对瘢痕上皮细胞TGF-β1、ITGB1、MMP-1 mRNA表达水平的影响。4. Western Blot法于蛋白层面检测青蒿琥酯作用后上皮细胞TGF-β1及ITGB1表达情况。ELISA法检测细胞培养上清液中MMP-1蛋白含量的变化。结果：1.瘢痕上皮细胞接种于细胞培养瓶内贴壁生长,倒置显微镜观察发现培养的细胞多为多角形,细胞长满时排列紧密,呈铺路石样。免疫组织化学抗角蛋白抗体染色呈阳性,抗波形蛋白抗体染色阴性。2.MTT检测结果显示,青蒿琥酯对细胞增殖有抑制作用,且呈现浓度依赖性。150μM浓度组与空白组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余组与对照组比较差异均有统计学意义(P0.01)。用药组之间两两比较,除了150 μM浓度组与300 μM浓度组之间差异无统计学意义(P0.05)外,其余差异均有统计学意义(P0.05)。据此下述实验设置的青蒿琥酯浓度组分别为：0、300、600,1200,2400gM。3.镜下观察发现青蒿琥酯作用后,细胞的形态发生不同程度变化,细胞出现皱缩,细胞变圆,胞浆变少,且随着浓度升高变化越明显。4.荧光定量RT-PCR检测显示青蒿琥酯作用后,人皮肤增生性瘢痕上皮细胞TGF-β1、ITGB1 mRNA表达水平呈下降趋势,与空白对照组比较差异均有统计学差异(P0.05)；而MMP-1的mRNA表达则呈不同程度的上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。各用药组之间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。5. Western Blot法检测显示：不同浓度青蒿琥酯作用后,瘢痕上皮细胞的TGF-β1、ITGB1的表达水平呈不同程度下降,300 μM浓度组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余组与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),各用药组之间两两比较,除300μM浓度组与600 μM浓度组ITGB 1表达差异无统计学意义外(P0.05),其余均有统计学意义(P0.05)。6. ELISA法检测显示：不同浓度青蒿琥酯作用后,细胞培养上清液中MMP-1蛋白含量呈不同程度的上升,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。各用药组之间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论：1.通过酶消化法能成功获得人皮肤增生性瘢痕上皮细胞,可经胰酶消化去除杂质细胞从而获得较纯的上皮细胞。2.青蒿琥酯对体外培养的人皮肤增生性瘢痕上皮细胞增殖有抑制作用,并呈现浓度依赖性,对细胞的形态也有一定的影响。3.青蒿琥酯作用于人皮肤增生性瘢痕上皮细胞后,可于mRNA及蛋白水平下调TGF-p1和ITGB1的表达,同时上调MMP-1的表达并呈现浓度依赖性。上皮细胞TGF-β1、ITGB1、MMP-1表达的变化是否对真皮层及皮下组织的胶原及细胞外基质的合成、胶原的分解及组织纤维化有影响,还有待进一步研究。
【关键词】：青蒿琥酯 皮肤 增生性瘢痕 上皮细胞 增殖 转化生长因子β1 整合素β1 基质金属蛋白酶1
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R751
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-27
• 结果27-39
• 讨论39-44
• 结论44-45
• 参考文献45-50
• 附录 英文缩略词表50-51
• 综述 皮肤上皮细胞参与创伤愈合及瘢痕形成的研究进展51-64
• 参考文献58-64
• 致谢64-66
• 攻读学位期间发表的学术论文66-67
• 附件67-73

【参考文献】

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1 李战;青蒿琥酯对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原沉积的影响[D];广西医科大学;2014年

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本文编号：264846