解脲支原体U.Parvum基因分型和分子流行病学研究

发布时间：2020-05-25 04:36

【摘要】： 支原体属柔体膜纲微生物，1954年，Shepard首先于非淋菌性尿道炎病人的尿道中分离得到，并对其寄生形态作了描述，1974年被确定为—独立的属。解脲支原体是支原体属中最小的一种，没有细胞壁，于光镜下不易观察到，因其能够分解尿素而得名。正常男性其泌尿生殖道解脲支原体菌群的寄生率约为25％，女性其泌尿生殖道菌群的寄生率约为0～80％，其中又以解脲支原体第一生物群(U.parvum)更为常见。关于致病性的报道所见尚少，目前临床已确定解脲支原体可以导致大约15％的男性非特异性尿道炎，在男性不育中可能起着不可忽视的作用。近年来被普遍关注的不良妊娠结局也与解脲支原体有关。随着性传播疾病的认识，人们也了解到泌尿生殖道解脲支原体感染与性活动传播有关。病人感染解脲支原体后，临床表现多种多样：部分患者病程长，症状明显；部分病人病程较短、症状不明显或者仅为隐性携带；部分患者病原体仅处于下生殖道，而有的感染则上行引起盆腔附件炎症；部分孕期患者导致严重的不良妊娠结果，而有的则没有影响。一些学者推测，这些不同的临床过程可能与不同的 U.U.型别有关。目前的血清学分型方法将U.U.分为14个血清型，但这些型别与临床疾病过程的关系并不确定，血清学分型方法有诸多缺陷限制了其临床应用。现在较多的研究以解膝支原体的 PCR基因分型技术为基础，国内尤以限制性片段长度多态性分析 (PCR一RFLP)为常用130]，但后者仍存在操作复杂、仪器要求较高、结果判定困难等因素，限制了临床广泛应用。因而发展一简便、经济、易于临床应用的基因分型方法就很迫切。我们的研究根据Kon咖nrong等关于解睬支原体U.p~m、 U.urealvticum两个种以及u.p~m三个型的划分的研究结果[32]，针对MBa抗原基因5/末端设计型特异性引物，建立复合PCR基因分型方法，对解睬支原体U.p~m分型。本实验标本来自STD 门诊诊断为NGU的病人，经过培养分离出解眼支原体，再提取模版DNA，参考Teng等的反应条件，应用u.u.通用引物PcR划分两个种，检出U.P~阳性标本，后采用各型特异性引物，参考 Kongfanrong等的反应条件进行复合PCR基因分型，扩增产物经涣乙锭(0 .5林留ml)染色后，1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，，在紫外线灯下观察结果。结果提示:应用U.U.通用引物进行PCR，1、3/14、6、8 2000级硕士研究生论文型标准株均得扩增，8型扩增出448bp的条带，其余三型扩增出 403bP的条带，与理论推测及其它文献结果报道一致。应用型特异引物扩增U.parvuml、3/14、6型，分别得到398、369、442bp的条带，与理论推测及其它文献结果报道一致。经过对衣原体、白念等下泌尿生殖道其他微生物的PCR扩增，未发现阳性条带。全部61例U.U.标本均得到阳性扩增结果，除1例为U.urealyticum 外，其余均为U.p~，占98.36%;扩增率100%。进一步分型结果显示，3/14型占86.67%、l型占5 .00%、6型占1 .67%、1和 3/14混合型占6.67%。在60例阳性标本中，16例NGU症状明显的病人中，U.p~m各型分布具有统计学上的显著性差异，结果以1型、混合型、3/14型为最多，以前二型的症状较为明显，而 3/14型以隐性携带较多见。因之推测1型、或者1和3/14型混合型协同作用导致NGU。在不同社会层次内U.p~各型构成亦有统计学上的显著性差异，各型分布均以中层为最多。而U. p~各型与年龄、性别、非婚性接触、病程、伴发不同STD等方面均无统计学上的差异。本文建立了解眼支原体U.P理n八lm的基因分型方法，并用于临床标本的分型。较之以往，该方法敏感、特异而又简便、经济、易于临床推广应用。通过小样本临床分型研究提示1型、1和3/14 2000级硕士研究生论文混合型与NGU有关，而3/14型更倾向于正常寄生。这也为解腺支原体感染的防治和深入研究莫定了基础。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R759

【引证文献】