瞬时受体电位锚蛋白1对角质形成细胞吞噬功能影响的研究

发布时间：2020-05-25 18:58

【摘要】：背景:众所周知紫外线为黄褐斑等色素沉着性皮肤病的主要病因之一,亦是白癜风等色素脱失性皮肤黏膜疾病发病的诱因及治疗手段之一。紫外线暴露后的治疗策略多集中于黑素细胞增殖及黑素合成等中下游环节,而针对其始动环节的靶向治疗较少。瞬时受体电位锚蛋白1(Transient Receptor Potential Ankyrin 1,TRPA1)作为一种非选择性钙离子渗透型通道参与细胞的多种生命活动。近年来有研究表明在表皮黑素细胞中,紫外线激活TRPA1通道增加细胞内钙离子内流,促进早期的黑素合成。Bellono等研究团队提出了TRPA1可能是唯一的眼外光转导通路的理论。在表皮细胞中,黑素细胞产生的黑素并通过吞噬向角质形成细胞转运。此外,研究表明钙离子在细胞吞噬的过程中起着重要的作用。因此研究TRPA1光转导通路在表皮角质形成细胞中的作用及其机制,对于深入了解紫外线相关色素障碍性皮肤病发病机制及调节黑素小体转运的上游机制具有重要意义。目的:1.明确瞬时受体电位锚蛋白1在角质形成细胞中的光转导作用。2.探讨瞬时受体电位锚蛋白1对角质形成细胞吞噬功能的影响。方法:1.琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)检测人永生化角质形成细胞系(HaCaT细胞)有TRPA1基因的表达。2.Western Blot法检测HaCaT细胞中TRPA1蛋白的表达。3.流式细胞仪检测到UVA、UVB照射后,HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流,以及激动或拮抗TRPA1后,HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流。4.激光共聚焦显微技术检测UVA、UVB照射后,TRPA1通道对HaCaT细胞吞噬功能的影响。结果:1.琼脂糖凝胶电泳、qPCR和Western Blot检测到HaCaT细胞中有TRPA1基因及蛋白的表达。2.在UVA或者UVB的照射下,流式细胞仪检测HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流显著增高。3.流式细胞仪检测激动TRPA1通道HaCaT细胞钙离子的内流显著增高,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流显著降低。4.流式细胞仪检测激动TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著减少。5.激光共聚焦显微镜观察激动TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著减少。结论:1.UVA及UVB均通过激活TRPA1通道,诱导HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子内流,即TRPA1通路在角质形成细胞中具有光转导作用。2.UVA及UVB均通过TRPA1通路增强HaCaT细胞的细胞吞噬功能。
【图文】：

；采用 qPCR 法检测 TRPA1-HEK293T 细胞（阳性对RPA1mRNA 的相对含量分别为：0.927±0.029、0.311检测对照组 HEK293T 细胞（TRPA1 质粒转染细胞右有 TRPA1 蛋白的免疫条带（如所示图 2）。

1 基因的表达。A：琼脂糖凝胶电泳可见 Ha物，大小约 5000bp；B：图中 TRPA1-HEK29可见 HaCaT 细胞中有 TRPA1 mRNA 的表达
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R758.1

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本文编号：2680597