斑块型银屑病表皮p16～（INK4a）基因启动子甲基化的初步研究

发布时间：2020-05-31 05:03

【摘要】：目的 1、研究银屑病表皮p16~(INK4a)基因启动子甲基化状态 2、分析银屑病表皮p16~(INK4a)基因启动子甲基化与p16~(INK4a)mRNA表达量的关系 3、初步探讨银屑病表皮p16~(INK4a)基因启动子甲基化与IFN-γ受体和TNF受体mRNA表达的相关性 4、探讨除启动子甲基化外，其它影响银屑病表皮p16~(INK4a)基因表达的主要因素 方法 1、收集56例斑块型银屑病患者皮损处皮肤，其中28例患者同时采集距皮损边缘1cm左右外观正常皮肤。标本分为3组：皮损组、皮损周外观正常的未受累皮肤组(以下称未受累皮肤组)、以健康皮肤为对照组(以下称健康对照组)。分离表真皮，提取表皮DNA和RNA。 2、按银屑病面积和严重性指数(PASI)评分评估银屑病患者病情严重程度。 3、应用MSP方法检测表皮p16~(INK4a)基因启动子甲基化状况，并分析其与临床资料的相关性。 4、应用RT-PCR方法检测表皮p16~(INK4a)mRNA表达水平，分析银屑病中p16~(INK4a)启动子甲基化与其mRNA表达的关系。 5、应用RT-PCR方法检测表皮IFN-γ受体和TNF受体mRNA表达水平，分析p16~(INK4a)启动子甲基化与两受体表达的相关性。 6、应用PCR-SSCP方法检测表皮CDKN2A基因位点外显子E1α、E1β和E2缺失和突变情况。 结果 一、斑块型银屑病患者皮损表皮p16~(INK4a)基因启动子甲基化率增高，并与皮损严重程度和活动性有关，吸烟和有银屑病家族史的患者p16~(INK4a)甲基化发生率增高。 1、28例患者皮损和未受累皮肤表皮p16~(INK4a)基因启动子甲基化率分别为32.14％(9／28)和7.14％(2／28)，健康对照组中未发现p16~(INK4a)基因启动子甲基化(0／38)，皮损高于未受累皮肤(P＜0.05)，未受累皮肤与健康对照组比较无
【图文】：

中国协和医科大学博士学位论文病情得以长期缓解。基因甲基化后DNA序列并不改变，，通过去甲基化作用可能使基因表达恢复正常(见图1)。甲基转移酶抑制剂5一氮一2一脱氧胞昔在治疗肿瘤的临床研究中获得了良好的效果I’2，’3]。提示调控基因启动子甲基化，从基因水平控制导致疾病发生和发展的“开关”，不但在理论上可行，也显示了一定的临床应用前景。因此，研究基因启动子甲基化状态有可能成为衡量银屑病严重程度的分子标记和治疗靶标。图1甲基抑制剂可使转录因子与启动子重新结合，靶基因恢复正常转录.本课题组最近研究发现斑块型银屑病患者外周血单一核细胞p16NIK4，基因启动子甲基化率约为70%，较健康对照增高【’4】。本实验结果发现皮损处表皮中该基因启动子甲基化率约为30%。为什么前者较后者的发生率高?可以解释为虽然银屑病患者外周血单一核细胞P16NIK4“高甲基化可能会导致细胞异常增殖

图1p6lmNRA表达PCR产物凝胶电泳图(m:NDA分子量标记，250Pb示P16lNK4a扩增片段，11:阴性对照)图2内对照PCR产物凝胶电泳图(m:DNA分子量标记，1SOPb示内对照扩增片段，11:阴性对照)
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R758.63

【引证文献】

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1 郝俊霞;p16异常甲基化及其表达和DNMT1表达在宫颈癌变中的研究[D];山西医科大学;2011年

本文编号：2689335