我国部分地区成人面部皮肤老化相关因素及香烟烟雾提取物与尼古丁致皮肤老化作用和机制的研究

发布时间：2020-06-06 08:48

【摘要】： 人的皮肤老化是一个非常复杂的过程，影响皮肤老化的因素主要包括遗传因素和环境因素。有相当多的因素可以影响皮肤老化的过程及速度，这些因素之间相互影响、相互作用，错综复杂。由于面部长期受到日光、温度、湿度等外界环境因素的作用，变化较大，所以面部皮肤在衰老时较其他部位的皮肤有明显的临床表现。本课题首先调查了中国人面部皮肤老化时的特点和其相关影响因素，然后又从细胞学角度分析了香烟致皮肤老化的作用和其相关机制。 本研究第一部分主要调查了中国人面部皮肤衰老的特征及其之间的关系，并研究了中国人面部皮肤老化时皱纹发生的危险因素。本研究共调查了195名不同年龄阶段、不同职业的健康人群。采集完图像后，按照Jin Hochung的图像册对每个调查者的图像进行对比分级。然后在SPSS 11.5统计软件包下对各相关因素进行统计学分析。结果显示皱纹同色素变化一样是中国人面部皮肤光老化的主要特征；色素变化在两性中的改变是有区别的，脂溢性角化是男性人群中的主要色素改变，，而色素斑则是女性的主要色素变化；光暴露时间、吸烟以及女性性别是中国人皱纹发生的危险因素。 根据第一部分研究的结论以及众多流行病学的研究结果，本课题后两部分着重从细胞学角度研究香烟烟雾致皮肤衰老损伤作用和机制。主要包括：1．研究香烟烟雾提取物和尼古丁致原代体外培养皮肤成纤维细胞的衰老作用；2．研究香烟烟雾提取物对原代体外培养皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响和致细胞衰老损伤的机制。 本课题研究目的： 1、研究中国人面部皮肤衰老过程中皱纹和色素变化的特点，调查光暴露时间、吸烟和性别等因素与中国人面部皮肤衰老的关系。 2、探讨香烟烟雾提取物(CSE)和尼古丁对原代培养的皮肤成纤维细胞生长和增殖的影响作用。 3、观察CSE对皮肤成纤维细胞胶原合成的影响；明确CSE致皮肤成纤维细胞的氧化损伤机制。 研究方法： 1、采用面对面的现场问卷调查方式进行随机的调查，对被调查者的年龄、性别、吸烟和光暴露时间等信息进行采集。被调查者需进行面部拍照，采集图像。按照Jin Hochung的东亚人面部图像册对每个调查者的面部图像进行比对分级。然后采用按照图像比对的方法对每个调查者的面部图像的皱纹和色素变化情况进行评分和分级。然后在SPSS 11.5软件包下对各影响因素进行统计学分析。 2、采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测CSE和尼古丁对体外皮肤成纤维细胞存活力的影响，并在光镜下和透射电镜下观察CSE作用后的细胞形态和显微结构变化；绘制不同浓度的CSE和尼古丁作用于成纤维细胞的生长曲线；β—半乳糖苷酶染色方法检测CSE连续作用5代后成纤维细胞β—半乳糖苷酶的变化情况，并绘制正常培养5代和CSE连续作用5代后细胞的生长曲线；流式细胞仪检测不同浓度的CSE作用于成纤维细胞后细胞周期的变化情况。 3、用分光光度检测法及逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法测定CSE对成纤维细胞培养基中分泌的胶原含量和Ⅰ型前胶原表达的影响；用分光光度法检测胞浆内活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。 研究结果发现： 1、色素斑和脂溢性角化的数目随着年龄的增长而增多；在50岁年龄段以上女性人群中色素斑的数目要比男性多，而在60岁以上男性人群中脂溢性角化的数目要比女性更为普遍；年龄与皱纹改变、色素变化成正相关。在控制了年龄和性别之后，皱纹与色素改变存在着正相关。除年龄外，吸烟、光暴露时间和女性性别均是发生严重皱纹的危险因素。 2、CSE作用细胞后成纤维细胞呈典型的损伤形态；随着CSE浓度的增大和作用时间的延长细胞存活力明显下降，高浓度的尼古丁可以使成纤维细胞的存活力下降，而低浓度的尼古丁则促进成纤维细胞的增殖能力；细胞生长曲线示CSE各染毒组细胞的生长速度较对照组明显减慢，而低浓度的尼古丁作用的各组细胞生长速度较对照组明显增快；CSE染毒作用五代后的细胞经β—半乳糖苷酶呈显著阳性；CSE长期连续作用后的细胞生长曲线示细胞的生长速度明显减慢，对数生长期消失；细胞周期动力学显示随着CSE作用浓度的加大和作用时间的延长，G_1期、G_2期细胞数增加，S期细胞数减少。 3、CSE能够显著降低成纤维细胞分泌的可溶性胶原含量，上述抑制作用随着药物浓度的增高而增强；采用RT—PCR法对成纤维细胞Ⅰ型前胶原的mRNA进行检测，显示随着CSE浓度的增高其表达量降低；CSE作用于细胞后，细胞胞浆内ROS含量升高，SOD活性降低。 结论： 1、皱纹变化同色素改变一样是中国人皮肤老化的主要特征。吸烟，光暴露和女性性别是皱纹发生的危险因素。 2、CSE对体外培养的皮肤成纤维细胞具有损伤作用，对细胞的增殖和生长有一定的抑制作用；高浓度的尼古丁对皮肤成纤维细胞具有损伤作用，低浓度尼古丁对皮肤成纤维细胞的增殖有促进作用；CSE引起细胞DNA复制和有丝分裂障碍，对细胞的G_1期、G_2期有不同程度的阻滞。低浓度CSE长期的作用，可以促使原代培养的成纤维细胞迅速衰老。 3、CSE能够抑制皮肤成纤维细胞胶原的合成；CSE对成纤维细胞的损伤作用与氧自由基生成及其抑制细胞抗氧化能力有关。
【图文】：

行相关变量的均数比较，男性、女性观察者中49岁以下和50一69岁年龄段皱纹与色素变化的级别有相关性。图1.4皱纹、色素变化程度与年龄的关系皱纹价球性别.男性.女性皱纹

3光镜下CSE作用成纤维细胞24小时的形态(10x20倍)
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R751

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本文编号：2699441