THCA354凝胶剂抗过敏机制及经皮药代动力学研究

发布时间：2020-07-11 20:26

【摘要】：研究目的:过敏性皮肤病在世界范围内发病率高,且治愈后遇到过敏原易复发。临床上用于治疗过敏性皮肤病的药物虽有一定的疗效,但长期使用均存在一定的副作用。(E)-苯乙基3-(3,5-二羟基-4-异丙基苯基)丙烯酸酯(THCA354)是本课题组研究合成的一种新型多酚丙烯酸衍生物,并通过处方研究制为外用凝胶剂。本论文通过观察THCA354凝胶剂对临床上常见的过敏性皮肤病Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应的影响,并利用小鼠Ⅳ型超敏反应模型探讨THCA354凝胶剂抗Ⅳ型超敏反应的机制,通过微透析技术联用HPLC-MS/MS对THCA354凝胶剂进行皮肤药代动力学研究,为将其开发为治疗过敏性皮肤病的制剂奠定基础。研究方法:1.分别建立豚鼠主动皮肤过敏反应模型、大鼠同种被动皮肤过敏反应模型和小鼠变应性接触性皮炎模型以考察THCA354凝胶剂的抗过敏作用。2.通过RT-PCR、ELISA和流式细胞术测定Ⅳ型超敏反应小鼠Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Tregs)相关细胞因子及细胞水平反应,以探讨THCA354凝胶剂抗过敏免疫调节机制。3.建立测定小型猪皮肤中THCA354浓度的HPLC-MS/MS分析方法,并对此方法进行方法学的验证,作为微透析样品中THCA354的定量基础。4.使用微透析技术取样获得皮肤微透析样品,通过HPLC-MS/MS检测皮肤样品中THCA354的浓度,并绘制浓度-时间曲线,计算药动学参数。研究结果:1.THCA354凝胶剂抗过敏药效学研究结果表明:THCA354凝胶剂可明显抑制Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应引起的过敏性皮肤病。2.THCA354凝胶剂抗过敏机制研究结果表明:与模型组相比,THCA354凝胶剂能够降低DNFB诱导的ACD小鼠耳组织炎症浸润和皮肤水肿;下调Th1/Th17相关细胞因子及核转录因子IFN-γ,IL-17,IL-6,T-bet和ROR-γt水平;上调Th2/Treg相关细胞因子及核转录因子IL-4,Foxp3,IL-10,TGF-β及GATA-3的水平;并降低CD3+CD4+IFN-γ+T细胞和CD3+CD4+IL-17A+T细胞的数量而诱导CD4+CD25+Foxp3+T细胞和CD3+CD4+IL-4+T细胞的产生。3.建立并考察测定THCA354浓度的HPLC-MS/MS分析方法,结果表明该方法线性良好,回收率、精密度和稳定性等均符合体内药物测定要求,可用于微透析样品的测定。4.THCA354凝胶剂的经皮药代动力学研究结果表明:THCA354经皮给药后100min-12 h均有药物被检测到,药物在真皮层内停留时间长,可持续发挥治疗作用。结论:THCA354凝胶剂具有显著的抗过敏作用,其抗过敏机制研究发现:THCA354凝胶剂能有效抑制组织的炎症浸润和多种促炎因子的分泌与表达,同时可促进抑炎因子的产生,通过改变Th1/Th2/Th17/Tregs的免疫平衡,发挥免疫治疗作用。药代动力学研究发现,THCA354凝胶剂经皮给药后,吸收平稳,约480 min后巴马小型猪皮肤中THCA354的浓度达到峰值436.46±23.21 ng/mL,去除药物7 h后仍能在皮肤中检测到THCA354,在真皮层内停留时间长,可持续发挥治疗作用。
【学位授予单位】：中国人民解放军陆军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R758.2
【图文】：

过程图,超敏反应,过程

主要症状为皮肤红斑、瘙痒、水肿等[1, 2]。因其病因复杂、作、迁延不愈且常伴有瘙痒等症状，严重影响着患者的生活质量[3]。变超敏反应，根据其发生机制和特点，临床上将其分为四型，分别为：ⅠⅡ型超敏反应，Ⅲ型超敏反应和Ⅳ型超敏反应[4]。其中Ⅰ型和Ⅳ型超敏最为常见。超敏反应，即速发型超敏反应，又称为过敏反应，是某些变应原刺激机特应性 IgE 抗体而导致的一系列免疫应答。临床常见的皮肤Ⅰ型超敏反应性皮炎、荨麻疹、湿疹等[5]。I 型超敏反应发作迅速，一般只引起机，并无器质性损害，有遗传倾向，虽然极少危害生命，但极大的影响了量。I 型超敏反应发生过程主要分为 3 个阶段（如图 1.1 所示）：致敏阶和效应阶段。在致敏阶段，机体接触变应原，体内形成 IgE 抗体；在激再次接触同类变应原，体内释放白三烯等炎性介质；在效应阶段，炎性应组织和器官，发挥炎性作用[6]。

过程图,超敏反应,过程,半抗原

型超敏反应即迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity, DTH），主细胞介导的免疫功能紊乱反应。DTH 的发生主要依赖于特异性致敏 T化，这些 T 淋巴细胞对接触性过敏原小分子（半抗原）具有抗原特异获半抗原分子量通常小于 500 道尔顿，比识别它们并激活过敏反应的受体 100 倍以上[7]。DTH 主要分为 2 个阶段，致敏阶段和激发阶段（如图 1.2段由不同的 T 细胞群体调节[9]。DTH 的致敏阶段，发生在皮肤与半抗原。表皮内朗格汉斯细胞（Langerhans cells, LCs）摄取并处理半抗原，形复合物[10]。LCs 携带此抗原复合物向局部淋巴结移动，然后通过主要组物( major histocompatibility complex, MHC) 将抗原呈递给 T 细胞受体。在淋巴结中增殖并分化成为抗原特异性效应 T 细胞并迁移至血液中，和皮肤之间循环。在激发阶段，效应 T 细胞再次暴露于相同的半抗原迁移至皮肤，产生多种细胞因子引发皮肤炎症。

THCA354凝胶剂抗过敏机制及经皮药代动力学研究

THCA354结构

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