裂解型基因重组腺病毒对人黑色素瘤细胞及小鼠肝癌抑瘤作用的实验研究

发布时间：2020-07-13 10:17

【摘要】： 目的:构建裂解型腺病毒载体,研究其体外对黑色素瘤细胞及小鼠腹水型肝癌的抑制作用。 方法:利用本室已构建的pUCm-T-E1A质粒为模板进行PCR,将目的片段用HindⅢ、EcoRV双酶切后连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV质粒上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-E1A与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒表达载体pAdeasy-1-pAdTradck-CMV-E1A经pacI线性化后转染QBI-293A细胞;收获病毒重组子。将获得的重组病毒子感染A375黑色素瘤细胞。然后分别用RT-PCR、流式细胞仪及MTT法等方法鉴定E1A基因的表达并且研究其对小白鼠腹水型肝癌的抑制及其免疫功能的影响。 结果:成功构建了裂解型腺病毒Ad-E1A,可显著裂解A375黑色素瘤细胞,抑制细胞生长。Ad-E1A可体内抑制小鼠腹水型肝癌的生长,且对小鼠的免疫器官没有抑制,同时可提高中性粒细胞和单核细胞的数目。 结论:裂解型腺病毒Ad-E1A可在体外裂解黑色素瘤细胞,抑制人黑色素瘤细胞生长。体内抑制小鼠腹水型肝癌H22的生长,并可以提高小白鼠免疫功能。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R739.5;R735.7
【图文】：

2.2裂解型腺病毒对小鼠免疫器官的影响根据小鼠体重和免疫器官重量，按公式计算器官指数。结果致瘤组与非致瘤组(332)相比，胸腺指数均有所降低(如图2一ZA)，但PBS组(259)与Ad一EIA组(219)降低不明显，无统计学意义(p>0.05)。5一Fu组(64)的小鼠胸腺指数显著降低(p<0.01);致瘤组与非致瘤组

(13.s75xlo犯)白细胞数增加，但5一Fu组(4.4sxlog几)反而减少。致瘤组内，5一Fu组比PBS组，Ad一 EIA组白细胞数明显下降，差异极显著(p<0.01)(如图2一3A)。对白细胞中的淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞数统计分析，结果致瘤组淋巴细胞数与非致瘤组(6.65xlo，几)相比，PBs组(lo.53xlo垅)与Ad一EIA组 (9.025、109/L)淋巴细胞数上升，5一Fu组 (3.56xl0讥)淋巴细胞下降印<0.05)。致瘤组内，5一Fu组与PBs组、Ad一EIA组的淋巴细胞数差异显著(p<0.01)(如图2一3B)。致瘤组的中性粒细胞数与未致瘤组 (0.3xlo沉)比较，PBs组

(l.33xlog几)与Ad一EIA组(2.sxlog几)单核细胞数明显增加，5一Fu组(o.48xlog几)单核细胞数明显下降(P<0.05)。致瘤组内，5一Fu组与PBs组、Ad一EIA组的中性粒细胞数差异显著(p<0.01)。(如图2一3B)二二二:二N尽彭ive1.....PBSC二二J陇穿沁ec。咙rd...1千巧巧凡丈勺八序EIA**口幻区幻SRJ心r巴坦eq任 118nu50七曰n

本文编号：2753328