氟非尼酮对UVA诱导的光老化保护作用及其机制研究

发布时间：2020-07-16 14:48

【摘要】：目的： 探讨氟非尼酮(Fluorofenidone, AKF-PD)在UVA诱导的人皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblasts, HSF)衰老和小鼠皮肤光老化中的保护作用,及其可能分子机制。 方法： 1.培养原代人皮肤成纤维细胞,MTT比色法测定AKF-PD对UVA诱导HSF增殖抑制的影响。 2.不同浓度的AKF-FD (0,50,100,150μM)处理UVA照射(10J/cm2*3d)后的HSF,最后一次照光结束后24hr,分别用p-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老相关p-半乳糖苷酶活性,免疫印迹法(western-blot)检测sirt1、磷酸化mTOR和衰老相关蛋白p16的表达,以及RT-PCR检测sirtl的转录水平。 3.每次UVA照射后,用mTOR (mammalian target of rapamycin)抑制剂雷帕霉素(rapamycin, RP)(50nM)预处理HSF1hr后,再加AKF-PD孵育细胞。最后一次照光结束后24hr,分别通过qPCR检测sirt1转录水平和western blot测定sirt1的翻译水平。 4.动物实验：选取8周大小Fvb雌性小鼠,背部皮肤脱毛后测得小鼠的最小红斑量(minimum erythermal dose, MED)。由1MED开始,每周照射3次,每隔两周增加一次UVA照射剂量,在照射剂量达15J/cm2后维持不变,共12周。对照组小鼠不做任何处理,实验组和基质对照组小鼠局部皮肤每天擦拭2%AKF-PD凝胶或基质凝胶,照光时,在UVA照射后lhr擦药。12周后,观察小鼠背部皮肤改变,并取皮肤组织行HE染色,观察表皮厚度的变化。 结果： 1. AKF-PD可以逆转由UVA诱导的HSF增殖抑制,p-半乳糖苷酶染色率(p0.05)和P16表达的增加,并呈剂量依赖性。 2. AKF-PD能抑制UVA照射HSF导致的sirtl表达下降和mTOR磷酸化水平的升高,这种变化趋势也是呈剂量依赖性的(p0.05)。 3.RP能加强AKF-PD上调UVA照射后HSF中sirt1水平的作用p0.05)。 4.UVA照射后小鼠背部皮肤有明显的皱纹形成,表皮厚度增加,2%AKF-PD凝胶能明显改善上述皮肤光老化的表型p0.05)。 结论： 1. AKF-PD可以通过抑制mTOR促进sirt1的增加,从而延缓人皮肤成纤维细胞的衰老。 2.2%AKF-PD凝胶能显著改善小鼠光老化皮肤的表型。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R751
【图文】：

照射后的HSF，利用p-半乳糖苦酶染色试剂盒和western blot检测衰老相关p一半乳糖苦酶活性和P16蛋白表达。如图2 (a)所示，UVA照射后，细胞密度明显降低，细胞形态变圆边大[35]，染色阳性（蓝染）细胞数明显增多，阳性率(阳性细胞数/细胞总数）较对照组明显增高，其有统计学意义，如图2 (b)，17

P—半乳糖苷酶活性较对照组无明显改变。用western blot检测衰老相关蛋白pl6的表达，如图3所示，UVA照射可以诱导P16表达明显上升，P16作为经典的衰老指标[35]，它的升高表示UVA (10J/cm2*3d)可引起HSF细胞衰老。不同浓度AKF-FD处理UVA照射的细胞可以逐渐逆转这种上升趋势。单用AKF-PD时，pl6的表达较对照组并无明显上升。综上所述，AKF-PD对UVA诱导的HSF衰老有保护作用，在AKF-PD浓度为150tiM时作用最明显。(a)| P一~, CbJ jI‘ *T0-8860- *“ “ B ？ 50- m""“* n _?30- ■■￠20- ■ C ^ _(1.___■ _.__n Ml. 力‘. UVA - + + + + -E ?? fj AKF-PD :iiM) -- 50 100 150 150图2不同浓度AKF-PD对UVA诱导HSF的P-半乳糖苦醉活性的影”(A.对照组 B.UVA C.UVA+AKF-PD(50 uM ) D. UVA+AKF-PD(100uM )E.UVA+AKF-PD(150uM) F.AKF-PD(I50 uM ) *vsctrol 组，** vsUVA 组

图5 AKF-PD对UVA照射后HSF中mTOR磷酸化的影响.5 mTOR抑制剂RP对AKF-PD增加UVA照射后HSF中sirtl的影响每次UVA照射后，用RP (50nM)处理HSFlhr后，如前所述加用AKF-(ISO^M)，分别用qPCR和western blot检测sirtl转录和翻译水平。结果显图6 (a)、图（b)所示，UVA照射抑制HSF中sirtl转录和翻译水平，AKF-P

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本文编号：2758135