病毒载体介导的HyTK基因转移治疗恶性黑色素瘤的实验研究

发布时间：2020-07-17 00:17

【摘要】：将单纯疱疹病毒的胸苷激酶(Herpes simplex virus thymidine kinase，HSV-tk)基因导入肿瘤细胞中表达，联合使用药物丙氧鸟苷(Ganciclovir，GCV)可有效地杀伤肿瘤。其主要机理是：GCV作为一种核苷类似物，可在HSV-TK酶(胸苷激酶)作用下生成一磷酸化合物(GCVMP)，继而在细胞内其它酶的作用下生成三磷酸化合物(GCVTP)，后者可阻断细胞DNA复制，导致细胞死亡。另外，通过“旁观者效应(bystander effect)”还可以有效杀伤tk~+细胞周围的tk~-细胞。因此只要有一部分肿瘤细胞表达HSV-tk基因即可杀死全部肿瘤细胞。本研究用一种与潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin phosphotransferase gene，hph)相融合的HSV1-tk基因作为目的基因(称为HyTK基因)，构建了重组逆转录病毒载体LNCHyTK；用lipofectin将其导入包装细胞PA317中，获得了产病毒细胞PA317／LNCHyTK及含有重组病毒的细胞上清(病毒上清)；以恶性黑色素瘤细胞为主要对象，研究了逆转录病毒介导的HyTK基因转移联合应用GCV对小鼠恶性黑色素瘤细胞株B16的体外及体内杀伤作用。此外，还观察了HyTK基因／GCV对人宫颈癌细胞株HeLa和SiHa细胞，及人肝癌细胞株H7402细胞的体外杀伤作用。体外实验表明，逆转录病毒介导的HyTK基因转移可显著提高B16细胞对GCV的敏感性(较未转染的B16细胞高100-1000倍以上)，并且可观察到“旁观者效应”。HyTK基因／GCV系统对H7402细胞和HeLa细胞也具有
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1996
【分类号】：R739.5

【参考文献】