hsa-miRNA在皮肤黑素瘤中的表达及hsa-miRNA-21在黑素瘤细胞中的作用机制研究

发布时间：2020-07-21 08:37

【摘要】： 目的筛选在人皮肤黑素瘤中表达的已知hsa-microRNA,根据筛选结果,探讨相应的hsa-microRNA在该疾病中的功能,为阐明黑素瘤发病机制、寻求有效的治疗途径提供理论和实验依据。 方法采用SBC microRNA芯片技术,将6例人皮肤黑素瘤组织总RNA分别与9例健康人色素痣总RNA的混合物对比,筛选其中已知的468条hsa-microRNA表达情况。根据生物信息学的有关方法处理芯片实验数据,筛选出共同差异表达的候选hsa-microRNA。采用荧光实时定量PCR的方法,分别检测这6例人皮肤黑素瘤组织中的各候选hsa-microRNA的表达情况。将芯片和qPCR两种方法结论一致的候选hsa-microRNA确定为有意义的共同差异表达hsa-microRNA。检测表达差异最明显的hsa-microRNA在A375和M14细胞系中的表达情况。 采用microRNA-21 inhibitor脂质体瞬时转染黑素瘤细胞系,设立对照组,并设立microRNA-21 inhibitor 90nmol/L、180 nmol/L、270 nmol/L三个浓度,分别用CCK-8试剂盒检测细胞活性变化,并分析该浓度与细胞活性之间的关系。将活性变化最明显的一组细胞系用FCM术检测细胞周期与细胞凋亡的改变,同时用RT-PCR法检测其中的BRAF和p27基因mRNA表达水平。 结果 1、此6例人皮肤黑素瘤中miRNA-21明显上调表达,miRNA-320和miRNA-494明显下调表达。 2、黑素瘤细胞系A375和M14中均有miRNA-21不同程度的表达。 3、将miRNA-21 inhibitor转染A375和M14细胞,当抑制剂浓度为90nmol/L时,细胞活性受到明显抑制;提高抑制剂浓度,A375细胞活性受到进一步抑制,且二者之间存在相关性。 4、经转染miRNA-21 inhibitor且细胞活性发生明显抑制的A375细胞,其G1期细胞比率明显增高,而S期细胞比率明显降低,细胞凋亡比率增高。 5、经转染miRNA-21 inhibitor且细胞活性发生明显抑制的A375细胞中的BRAF基因和p27基因mRNA表达水平没有明显变化。 结论运用miRNA芯片技术,首次发现人皮肤黑素瘤组织中miRNA-21明显上调表达,miRNA-320和miRNA-494明显下调表达。miRNA-21在黑素瘤细胞中抑制细胞凋亡、促进细胞增殖,可能起原癌基因样的作用。miRNA-21对BRAF和p27基因的mRNA表达水平无明显影响。
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R739.5
【图文】：

图1mieroRNA的生物合成与作用机制示意图截至2007年2月，在http:/lmicrorna.sanger.ac.ukSangermiRNA数据库注册miRNA多达468条，httP:/渔里叫鱼匹鱼巡边组公布相应的miRNA预测的靶mRNA，为人们开展miRNA的表达谱以及相应功能研究奠定了基础。有关NA在人类生长发育、肿瘤、病毒感染性疾病等方面的研究工作正在热火朝

芯片点阵示意图

标标准化后数据基因表表 差差异基因信息表 表 图1一2数据分析流程图

【参考文献】

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本文编号：2764176