血小板源性生长因子受体α影响过氧化氢诱导的黑素细胞凋亡

发布时间：2020-08-14 19:18

【摘要】：目的:探讨血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的黑素细胞凋亡的影响。方法:以黑素细胞PIGI为研究对象,分别用不同浓度的H_2O_2作用后,用MTT法检测细胞活力,并计算半数抑制浓度。经H_2O_2处理的PIGI细胞转染空载体p CMV6或PDGFRα过表达载体p CMV6-PDGFRα,以不做转染的细胞为空白对照,RT-q PCR和Western blot检测转染效率。用半数抑制浓度的H_2O_2作用于过表达PDGFRα的PIGI细胞,MTT法检测细胞活力,绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中p38、磷酸化p38(p-p38)和cleaved caspase-3的蛋白水平;二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCDHF-DA)法检测细胞中活性氧簇(ROS)水平。结果:H_2O_2作用后PIGI细胞生长减慢,细胞凋亡率升高,细胞中ROS水平、p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平升高(P0.05),H_2O_2的半数抑制浓度为0.7 mmol/L。PDGFRα过表达载体能够成功上调PIGI细胞中PDGFRα的mRNA和蛋白水平(P0.05)。过表达PDGFRα后经过H_2O_2处理的PIGI细胞存活率升高(P0.05),细胞凋亡率下降(P0.05),细胞中的ROS水平下降(P0.05),p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平降低(P0.05)。结论:PDGFRα能够抑制H_2O_2诱导的黑素细胞凋亡,部分逆转H_2O_2对黑素细胞增殖的抑制作用,降低细胞中的ROS水平,其作用机制可能与p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平的变化有关。
【图文】：

＜0.01);PDGFＲα组凋亡率明显低于control组(P＜0.01)，见图4。这提示H2O2处理后细胞凋亡增多，而过表达PDGFＲα能够抑制H2O2诱导的PIGI细胞凋亡。Figure3．TheeffectofPDGFＲαonthecellproliferation．A:thecellgrowthcurve;B:thechangesofcellviability．Mean±SD．n=3．＆P＜0.05vsnormalgroup;*P＜0.05vscontrolgroup．图3PDGFＲα对细胞生长的影响Figure4．TheeffectofPDGFＲαontheapoptosisofPIGIcells．Mean±SD．n=3．＆P＜0．05vsnormalgroup;*P＜0.05vscontrolgroup．图4PDGFＲα对细胞凋亡的影响5PDGFＲα对细胞中ＲOS水平的影响Normal组、control组、negative组和PDGFＲα组的ＲOS水平依次为1.01±0.14、3.30±0.25、3.31±1.10和2.79±0.14。Control组、negative组和PDGFＲα组的ＲOS水平均高于normal组(P＜0.01);PDGFＲα组水平低于control组(P＜0.05)，见图5。这表明过表达PDGFＲα能够部分抑制H2O2导致的ＲOS水平升高。6PDGFＲα对细胞中p38、p-p38和cleavedcaspase-3蛋白水平的影响Westernblot结果显示，control组p-p38和cleavedcaspase-3的蛋白水平明显高于normal组，差异具有统计学意义(P＜0.05);PDGFＲα组p-p38和cleavedcaspase-3的蛋白水平明显低于control组，差·2063·

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