小鼠骨髓间充质干细胞与恶性黑色素瘤细胞体外共培养环境中相互作用及其机制的初步研究

发布时间：2020-08-22 15:50

【摘要】：目的 研究恶性黑色素瘤细胞与间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)间的相互作用及作用机制,从而进一步明确恶性黑色素瘤血管形成机制中内皮细胞来源和恶性黑色素瘤细胞多种因子表达情况及间充质干细胞对其表达的影响,丰富肿瘤局部微循环建立模式的相关理论,并为恶性黑色素瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)自分泌机制和正反馈环路的研究提供一定的理论依据。 方法 通过四肢长骨分离和骨髓腔冲洗得到骨髓,应用贴壁筛选等细胞筛选方法,选取适当血清浓度、细胞接种密度等细胞培养条件进行小鼠骨髓间充质干细胞的分离和扩增培养,通过倒置相差光学显微镜观察细胞光镜下形态,并应用免疫组织化学染色方法,通过倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察并检测CD44、CD105、CD34和CD45等指标的染色结果进行细胞表型鉴定。 通过体外进行MSC细胞的单独对照培养和与恶性黑色素瘤细胞(B16细胞)的非接触式共培养,应用倒置相差光学显微镜对比观察和分析单独对照培养和非接触式共培养条件下的MSC细胞光镜下形态,通过激光扫描共聚焦显微镜、倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察和检测CD44、CD105、CD34、CD45、Ⅷ因子、VEGFR-1和VEGFR-2等7种指标免疫组织化学染色结果,并对所得结果进行统计学处理以明确两组间7种指标免疫组织化学染色结果的差异和观察透射电镜下超微结构的变化,以及通过激光扫描共聚焦显微镜、倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察和检测MSC细胞和与恶性黑色素瘤细胞(B16细胞)在非接触式共培养条件下的恶
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R739.5
【图文】：

表明CD44强阳性(平均阳性率93.1%)，CD105阳性(阳性率79.2%)，CD34阴性(阳性率4.%7，免疫荧光阴性)，CD45阴性(阳性率6.%2，免疫荧光阴性)，见图1一3至图1一8。表1MSC细胞4种鉴定指标表达情况表表型鉴定平均阳性细胞数平均阳性率HIC染色强度++++++~+++一+荧光染色情况未测未测阴性阴性.1%2%7%293.79..463723172519染色指标CD44CD105CD34CD45注:平均阳性细胞数为每种指标在多个样品中阳性细胞数的平均值，取整数;平均阳性率为每种指标在多个样品中阳性细胞数占400个观察细胞的百分率的平均值。图1一1MSC鉴定实验24孔板培养细胞观察结果40X图1一2MSC鉴定实验24孔板培养细胞观察结果IO0x

2.3.7净化洁净室成套工程(百级无菌室)，北方净化机房设备公司，中国2.3.5Tnarswezl，o.4mu孔径，o.33emZ表面积，eostar公司，货号3470一elear，见图2一1和2一2。图2一1Trnaswell设备组件图2一2Trnaswell中的共培养插件3实验方法3.1体外环境B16细胞对MSC细胞的诱导分化作用3.1.1MSC细胞与B16细胞非接触式共培养实验3.1.1.1向MSC细胞培养瓶和B16细胞培养瓶中加入.02%5的胰蛋白酶尼DAT液sml，消化细胞5一7分钟，以镜下观察到少部分细胞脱落，大部分细胞形态变为圆形，失去原有梭形型态，即中止消化。3.1.1.2MSC中加入smla一MEM培养基和B16中加入15mla一MEM培养基，充分吹洗培养瓶壁6一7遍，使消化细胞脱壁。3.1.1.3将2个培养瓶中液体分别吸取到2个不同的离心管(50m)l中，IO00prm离心10分钟，弃去上清，进行细胞计数，依细胞数量，向离心30

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 郝希山,孙保存,张诗武,赵秀兰;双向分化肿瘤血管生成拟态的分子机制初步观察[J];中华肿瘤杂志;2003年06期

2 李中,张成,谢有梅,陈国俊,刘晓蓉;骨髓间质干细胞移植治疗DMD模型鼠的肌组织dystrophin/utrophin表达[J];中国医学科学院学报;2004年03期

本文编号：2800856