rhIL-24对A375黑色素瘤细胞体内外抗肿瘤效应及其分子机理的研究

发布时间：2020-09-07 10:57

　　 目的:为研究以hIL-24基因构建的原核表达载体pET-21a(+)/ hIL-24在大肠杆菌中表达及其部分纯化、复性得到的蛋白产物——重组人白介素24(rhIL-24)对A375黑色素瘤细胞体内外的抗肿瘤效应及其分子机理。 方法:以原核表达载体pBV220-hIL-24为模板构建新的pET-21a(+)/hIL-24重组原核表达载体系统,并在大肠杆菌中获得高效表达,将表达产物纯化、复性后得到初步纯化的rhIL-24,经Western-blot方法鉴定后,用rhIL-24刺激PBMC,收集细胞培养液上清,用ELISA方法检测PBMC分泌的IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量。用rhIL-24作用于体外培养的人A375黑色素瘤细胞,用MTT法去评价rhIL-24对A375细胞生长的影响,绘制出细胞生长曲线;通过流式细胞术(FCM),荧光染色等检测rhIL-24对A375细胞生长周期和凋亡的影响。用rhIL-24作用于鸡胚尿囊膜(CAM),观察其对血管新生的影响。在裸鼠真皮下建立人A375细胞黑色素瘤动物模型后,用rhIL-24治疗,测量瘤体的体积及重量以检测rhIL-24等对瘤体生长的抑制作用。用免疫组化检测肿瘤组织中的BAX、BCL-2、CD34及VEGF的表达情况,以确认经rhIL-24治疗后肿瘤细胞生长是否受到抑制及肿瘤组织血管新生是否减少。 结果:经PCR及酶切产物电泳证实所克隆的基因长度与理论值接近,经序列测定证实所克隆的基因与GenBank报道的hIL-24序列完全一致,为474bp。构建的原核表达载体pET-21a(+)/ hIL-24,经双酶切和PCR鉴定,原核表达载体构建正确。pET-21a(+)/ hIL-24转染的BL21宿主菌诱导表达后裂解菌体、提取包涵体的内容物,再进行SDS-PAGE电泳,有一条18.5KD左右的蛋白条带出现,与理论值一致。Western-blot检测该产物能与IL-24抗体形成特异性条带。含pET-21a(+)/ hIL-24的宿主菌BL21经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,rhIL-24在大肠杆菌中获高效表达。初步纯化的rhIL-24能刺激PBMC增加IL-6、IFN-γ及TNF-α的分泌, 72
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R739.5

【参考文献】

相关期刊论文 前8条

1 叶震敏,朱晔涵,盛伟华,缪竞诚,危少华,吴康,杨吉成;人白介素24重组蛋白的表达及其抗肿瘤机理的研究[J];生物工程学报;2005年05期

2 李晓丽,王世军;加味保安方对鸡胚尿囊膜血管新生的影响[J];中国微循环;2005年04期

3 马群风,江红,刘锟,朱捷,郑晓飞;Mda7/IL-24基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表达[J];军事医学科学院院刊;2004年03期

4 王世军,孙静,张栋,郭继龙,简隆磊,刘铠;鸡胚尿囊膜血管生长的特点及观测方法[J];生物医学工程研究;2004年01期

5 陈雄艳,李丽娥,盛伟华,龚爱华,缪竞诚,杨吉成;人白细胞介素-24基因的克隆及序列测定[J];苏州大学学报(医学版);2003年03期

6 郑江红,林子豪;皮肤恶性黑色素瘤治疗的进展[J];中华整形外科杂志;2003年01期

7 吴一凡,张双全,高秀玉,刘晓宇;乳糖诱导pET载体表达重组蛋白的研究[J];南京师大学报(自然科学版);2002年01期

8 武利存,宋守芹,王丽,张维东,孙公甲;平阳霉素对鸡胚绒毛尿囊膜血管内皮细胞生长的影响[J];细胞生物学杂志;2001年02期

本文编号：2813250