大疱性类天疱疮与HLA相关性研究

发布时间：2020-09-07 11:51

　　 引言 大疱性类天疱疮(Bullous Pemphigoid,BP)是一种自身免疫性疾病，好发于老年人，组织病理为表皮下水疱。直接免疫荧光示基底膜带免疫球蛋白沉积。其发病机理尚不清楚。近年来人们越来越关心其与遗传的关系。人类主要组织相容性复合体(HLA)是人类最基本的遗传标志之一，HLA是人体内最为复杂的遗传多态性系统，迄今为止，已发现大多数的自身免疫性疾病与HLA基因有关。很多国家的学者研究发现大疱性类天疱疮与HLA具有明显的相关性。 HLA复合体位于人类第6号染色体的短臂上，全长4000kb，含有4×10~6个碱基，约占人类基因组的0.1％，HLA复合体传统上根据其产物的结构表达方式，组织分布与功能可将这类基因分为三类基因。HLA-Ⅰ类基因主要包括HLA-A、B、C位点，编码HLA-Ⅰ类抗原，后者在所有有核细胞上均有表达。HLA-Ⅱ类基因包括HLA-D／DP、DR、DQ，由一组紧密相连的基因组成。HLA-Ⅲ类基因位于Ⅱ类基因和Ⅰ类基因之间。其中C2、C4A、C4B、Bf座位编码相应的补体成分。由于HLA复合体具有多个位点的共显性复等位基因系统，故它编码的基因表现出高度的多态性，多态性是HLA基因的重要特性之一，这使HLA可做为基因研究的理想标记物。本研究应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术，对30例BP患者HLA-A、B等位基因进行研究，探讨与BP相关的HLA-A、B等位基因。各国学者在对关于BP与HLA-A、B抗原(等位基因)相关性的报道结论不一，以往国外研究均采用血清学方法，病例较少，且抗血清的特异性很少。我们本次研究中采用了相对较大的样本，且采用DNA分型方法，特异性分型明显多于以前研究，结果较为可靠。 BP作为一种自身免疫性疾病，无论是由细胞免疫介导还是由体液免疫介导，皆需要CD4~+Th细胞参与。还要受到MHC-Ⅱ类分子的限制，MHC-Ⅱ类分子主要由HLA-D区编码。在机体免疫应答的发生和免疫调节 中，HLA一11类基因似乎起着更重要的作用，因为HLA一n类基因直接参 与机体免疫应答和免疫调节的全过程。T细胞对外来抗原刺激的应答，必 须先通过受体来识别抗原提呈细胞上的n类基因成分后发生反应，淋巴细 胞间的相互作用也受n类基因产物的调节。关于BP与HLA一DRBI等位 基因的相关性，国外报道最多的是HLA一DRBI*1 101(DRS)和HLA一 D拙1*04等位基因。但在国内关于此方面的研究尚无报道。我们应用 PCR一SsP技术对30例BP患者HLA一DRBI等位基因进行调查，并同168 例正常对照组比较，找出BP患者的HLA易感基因。关于BP与HLA一A、B 和HLA一DRBI等位基因的研究，我们的研究结果与国外研究有相同，也有 不同之处，说明在不同国家、民族的BP患者之间，虽然存在着相似的遗传 易感性，但还是不同程度地保持一定遗传距离。 近来研究发现细胞免疫可能参与了大疙性类天疙疮的发病。研究大疙 性类天疙疮患者血清中细胞因子，可更全面地认识大疙性类天疙疮中免疫 学机理。细胞因子，炎症过程与免疫调节之间关系密切。细胞因子与疾病 之间的关系相当复杂，一方面细胞因子可以通过免疫学机制甚至非免疫学 机制抗御和治疗某些疾病;另一方面细胞因子在某些情况下可以导致和 (或)促进某些疾病的发生，例如肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL- 6)，可能参与某些自身免疫性疾病发病。我们用双抗体夹心EUSA方法检 测巧例半个月内未接受皮质类固醇或免疫抑制剂治疗的大疙性类天疙疮 患者及20例正常人血清中IL一6、，rNF一。水平。研究患者血清中这两种 细胞因子水平与大疙性类天疙疮疾病严重程度(皮损数目)的关系。 方法 一、1.研究对象 患者组:为中国医科大学附属第一临床医院皮肤科和沈阳市第七人民 医院皮肤科住院大疙性类天疙疮患者，30例，均为汉族，彼此无血缘关系。 正常对照组:选择无血缘关系的汉族健康人90例，性别，年龄分布与患 者组相当。 2.采用酚一氯仿法从外周血淋巴细胞提取DNA。DNA扩增:PCR反应 条件:预变性96℃，l而n;变性96℃，255;退火70℃，455;延伸72℃，455， 5个循环。变性96℃，255;退火65℃，505;延伸72℃，455，21个循环。变 性96℃，255;退火55℃，lmin;延伸72℃，Zmin，4个循环。 3.统计学处理方法:相对危险率(RR)按Woolf公式计算:相对危险 率:RR二(ad)/(玩)等位基因检出率用直接计数法，各组间的等位基因分 布差异用四格表法进行卡方(xZ)检验，按Fishar法计算确切p值。 二、1.研究对象 患者组:为中国医科大学附属第一临床医院皮肤科和沈阳市第七人民 医院皮肤科住院大疙性类天疙疮患者，30例，均为汉族，彼此无血缘关系。 正常对照组:选择无血缘关系的汉族健康人168例，性别，年龄分布与 患者组相当。 2.采用酚一氛仿法从外周血淋巴细胞提取DNA。DNA扩增:PCR反应 条件:预变性94℃，5面n，变性94℃，305;退火65℃，1 min;延伸72℃，1 而n，共30个循环，后延伸72℃，5 ruln。 3.统计学处理方法:相对危险率(RR)按Woolf公式计算:相对危险率: RR二(ad)/(bC)等位基因检出率用直接计数法，各组间的等位基因分布差 异用四格表法进行卡方(xZ)检验，
【学位单位】：中国医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R758.66
【部分图文】：

3837图1大疤性类天疙疮患者HLA一B37PCR结果电泳图38为阳性。7%bp为内对照引物扩增产物，6O6bp，422bp’2可以判定为HLA一B37等位基因。

429bP141110图1电泳图大疤性类天疤疮患者HLA一DRBI，110x和HLA一DRBI*120xPcR结果说明:band10，11为阳性扩增产物位基因。，14为阳性。429bp为内对照引物扩增产物，176bp，248bP，172bp分别。根据表1可以判定为HLA一D邢1*110X和HLA一D拙1*120x等

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 贾然,吕巍,陈绍先;HLA研究进展[J];国外医学(免疫学分册);1985年06期

2 宋芳吉,李惠刚;HLA分型方法及其临床意义[J];生理科学;1988年04期

本文编号：2813302