人外泌汗腺腺上皮细胞的生物学特性及体外重建汗腺的实验研究

发布时间：2020-09-14 18:07

　　 汗腺是皮肤重要的附属器之一,分为外泌汗腺和顶泌汗腺,其中外泌汗腺起着体温调节、分泌、代谢等重要作用。它由小汗腺胚芽分化而成,胚胎24周时开始分泌汗液,乙酰胆碱引起细胞内游离钙增加是人外泌汗腺腺上皮细胞分泌汗液的基础。深入研究外泌汗腺的结构和功能意义重大。第一,外泌汗腺分为分泌部和导管部,分泌部为无分支管状腺,由单层腺上皮细胞和其外周的肌上皮细胞构成,结构相对简单,但功能完整,体外培养外泌汗腺腺上皮细胞为深入研究其结构功能提供了可能,也为其它外泌腺体分泌和重吸收机制的深入研究提供了重要模式;第二,外泌汗腺分泌部和导管部均是小管结构组成,人体中还有许多器官含有小管结构,如血管、肝小管、肾小管、乳腺小管、胰腺小管等,小管起着分泌、吸收、重吸收、体液运输等重要作用,研究表明,在小管发生过程中有一些共同的作用机制,因此,体外诱导外泌汗腺小管形成和三维重建汗腺不仅有利于研究汗腺的细胞生物学和发育生物学的相关问题,对研究其它器官的小管发生和体外重建也有借鉴和指导作用;第三,汗腺重建模型的建立将为外泌腺体药理机制的基础研究等提供工具;第四,皮肤缺损导致汗腺缺失或其它疾病导致汗腺结构功能异常将严重影响患者的生活质量。组织工程皮肤发展至今,已基本解决了创面覆盖的问题,但未达到真正的组织结构和功能的完全重建,缺少毛囊、汗腺、皮脂腺等附属器,从而不能完成排汗、分泌等重要功能。体外重建汗腺将为研究带汗腺的组织工程皮肤奠定基础。 上世纪90年代始,国内外有研究者进行了外泌汗腺细胞培养方面的研究,均采用的是组织块法,体外成功培养了外泌汗腺细胞,培养的细胞保持了上皮细胞的特点和主动转运离子和水的能力以及一些药理学特性,如在拟胆碱能药(如氯化氨甲酰胆碱)的刺激下培养的分泌部细胞能形成短回路电流,该作用能被钠离子阻滞剂(阿米洛利)所抑制,这为从体外进一步研究汗腺细胞的生理功能奠定了基础。但其缺点在于获得的细胞量少,所需培养时间长,成纤维细胞污染严重,且从完整的汗腺中长出的细胞包括导管部细胞和分泌部细胞,从形态上不能鉴别。另外,体外诱导汗腺小管形成、三维重建汗腺尚未见报道。因此,建立高效汗腺细胞分离培养方法,并探讨其体外重
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R751
【部分图文】：

、HGF 相关信号传导实验利用 western blot 技术对加入 HGF 后 0min、5min、30min、90min、汗腺腺上皮细胞中 p-ERK1/2、p-AKT1/2/3、p-IκBα蛋白表达进行检测信号通路是否活化及其时间，结果发现，在未加入 HGF 时，三种磷酸化，随着时间的推移，ERK1/2、AKT1/2/3、IκBα均被显著磷酸化，达到渐下降，但每个蛋白磷酸化高峰值时间不同：p-ERK1/2 在 HGF 刺激 5m高峰，RIOD 增加 8.1 倍(P<0.01)、p-AKT1/2/3 在 HGF 刺激 5min 时表达IOD 增加 12.8 倍(P<0.01)、p-IκBα在 HGF 刺激 90min 时表达达到高峰7.2 倍(P< 0.01)。白质的磷酸化与去磷酸化作为传递外界各种信息的信号传导机制，在细胞中发挥重要作用，一系列的蛋白激酶及其磷酸化构成了信号传导的级联反信号传导是一个网络的动态的过程，各个信号通路之间不能截然分开(见图了几个在细胞生物学和小管形成上均有重要作用的信号通路，进行初步观

、 倒置显微镜观察细胞（团）生长：代细胞在 Matrigel 中能存活，24 小时后可见细胞伸展，倒置显微镜下观圆形，中间有圆形核，接种后 3 天，大多细胞分裂成 2-4 个细胞组成的，聚焦平面细胞呈环状排列结构，直径为 14.72±5.06μm；5 天后细胞.44±5.12μm，可见细胞约为 5-8 个，细胞之间互相连接形成囊性或管状团直径为 50.83±9.92μm，可见细胞为大约 10 个；9 天后细胞团直径为2μm，可见细胞约为 20 个细胞；11 天后细胞数继续增多，可见细胞团球状，直径为 115.28±20.13μm，与外泌汗腺大体结构观察相似(照片 4-1后细胞团直径为 132.50±29.42μm。.胶原凝胶中细胞不伸展，不能形成细亡。Matrigel 中，前 9 天前细胞团直径平均每两天增长约一倍，每两1，有显著差异，但 9 天后增殖减慢，第 11 天和第 13 天之间无差异(P>可能与 Matrigel 中营养成分消耗和细胞之间的接触抑制有关。** ** ** ** **

白结合后激活信号通路示意图，多条信号途径调节细胞的细胞骨架结构等，最终使细胞形成管状结构蛋白以直接连结在C-met的结合位点上或通过Grb2参与M形成中起了关键作用。有实验表明，在C-met突变不形成，但是当过度表达Gab1时，其功能恢复，能意义的是，Gab1缺如的小鼠与HGF或C-met缺陷有导致的早期胚胎死亡，肝脏变小和肌前体细胞移时，Gab迅速酪氨酸磷酸化，产生多个SH2(Ssine binding)的结合位点，如SHP2酪氨酸磷酸酯酶、-γ)、SHIP-1磷脂酰肌醇 5’-磷酸酯酶和适配蛋白ab的这些下游分子中，只有充足的SHP2对分支发氨酸磷酸酯酶

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本文编号：2818486