P16在尖锐湿疣与鲍温样丘疹病中的表达及与HPV型别的关系的探究

发布时间：2020-09-16 11:00

　　背景:鲍温样丘疹病(bowenoid papulosis,BP)及尖锐湿疣(condylomaacuminatum,CA)与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染密切相关,尖锐湿疣多与低危型HPV(low-risk HPV)感染相关,而鲍温样丘疹病则与高危型HPV(high-risk HPV)感染密切相关。Wade等提出部分BP病例仅表现出CA的病理形态,而不具有显著的细胞排列紊乱及异型性,尤其是出现挖空细胞时,很难将二者鉴别开来,可能部分有发生不典型增生及恶变的可能。研究表明在HPV相关的CA与BP皮损中p16蛋白过度表达,且表达升高的程度不同,部分研究认为p16蛋白的表达升高与高危型HPV的感染呈正相关,有些则认为只有阳性结果呈正相关,而阴性结果无关。目的:检测p16蛋白在BP以及CA组织中的表达情况,并检测上述组织中HPV感染的型别。探讨p16蛋白在BP与CA中的表达情况,p16与HPV型别之间的关系,p16与HPV型别分别在鉴别诊断BP与CA中的意义及在推测向不典型增生及肿瘤转化的可能。为可能向肿瘤及不典型增生转化的尖锐湿疣与鲍温样丘疹病的临床治疗提供依据。方法:收集外阴病理活检确诊为鲍温样丘疹病及尖锐湿疣的患者的活检标本,应用免疫组织化学法检测p16蛋白,导流杂交基因芯片技术检测上述组织中HPV感染的型别。结果:p16在正常对照包皮、尖锐湿疣、鲍温样丘疹病中的表达均值有统计学差异。且均值正常包皮低于尖锐湿疣,尖锐湿疣的均值低于鲍温样丘疹病的均值。28例尖锐湿疣中HPV6 DNA阳性14例(占50%),HPV11DNA阳性9例(占32.1%),HPV6及HPV11 DNA混合阳性3例(占10.7%),HPV11及HPV18 DNA混合阳性1例(占3.6%),未测出HPV DNA阳性1例(占3.6%)。28例鲍温样丘疹病标本中HPV16 DNA阳性17例(占60.7%),HPV6DNA阳性1例(占3.5%)、所测的31种HPV DNA均阴性10例(占35.7%)。结论:尖锐湿疣感染的HPV感染率为96.4%,以HPV6、11为主,鲍温样丘疹病感染HPV阳性率为64.2%,以HPV16为主。p16~(INK4a)在高危型HPV阳性的标本中的表达阳性率高于在低危型HPV表达阳性的标本中的表达,远远高于在HPV阴性的标本中表达,且有统计学差异,但阴性结果无相关性。
【学位单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R752.53;R758.6
【部分图文】：

免疫组化

尖锐湿疵组织:p16表达免疫组化X400

包皮,免疫组化,细胞周期蛋白,宫颈活检

图1一3正常对照包皮:P16表达免疫组化X400讨论根据细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的不同，细胞周期蛋白可以分为两:eIP/KIP家族—p21、p27、p57:INK4家族—p一6、p15、pls、plg。p在内皮受损时发生巨大变化，提示p16‘nk4。在肿瘤形成或细胞不典型增生中胞增殖〔3。〕。HPv病毒癌蛋白E6、E7和一些细胞周期蛋白导致了细胞周期与一系列后表达的变更。QueirozC进行了50例宫颈活检标本(包括阴性标本和CIN)组化研究中，比较了p16、p53、ki67(MIB抗体)在宫颈上皮内瘤形成的不表达量的不同。经过与组织病理结果的比照，发现p16ink4。与ki67较pyclinDI与肿瘤形成的相关性更大。单克隆抗体p16ink4Q与ki67可运用被HPV感染的宫颈活检标本，将其分为CINI(p16ink4a阳性)和高级别(细胞增生指数ki67)。设想通过这些细胞周期蛋白的免疫组化测定区分出治疗或是积极治疗的HPv感染的cIN病人〔3，’。

基因芯片技术,操作说明书,步骤,超净台

2.PCR体系配制:25ul反应体系中lul模板，23.25ulPCRmix，0.75ulTaq酶。试剂的配置在超净台内完成。按操作说明书操作。3.PCR反应:反应程序为:95度gmin95度20see55度30sec40个循环72度30see72度smin4度HOLD4.导流杂交基因芯片技术:使用凯普医用导流杂交仪和凯普HPV基因分型检测试剂盒，按照操作说明书逐步操作试验，分型检测HPV。

【参考文献】