JNK1和JNK2过表达对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖及凋亡的影响
【学位单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R739.5
【部分图文】：
学硕士学位论文 清液，加入按 DMSO：FBS=1：9 比例配置的冻存液 1 mL，轻轻吹液装入冻存管中，标记细胞名称、冻存时间及操作者的姓名；存管放置 4℃冰箱中 20 min~30 min，随后放入-20℃冰箱中 90 min0℃冰箱中过夜，第二天放入液氮罐中，长期保存。、JNK2 腺病毒过表达载体的构建重组技术，将 JNK1、JNK2 分别插入 pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV1 和 JNK2 序列均为人源 mRNA 序列（human JNK1；human JNK2）和目的基因信息
宁夏医科大学硕士学位论文 集脱落细胞悬液，用离心机，2000 rpm，离心 5 min，吸去上清液，加入 6 m培养基+10%FBS+2.5%甘油）的 ST buffer，涡旋震荡混匀，冻融 3 次，用离心rpm 离心 5 min,收集上清液（P3）。○7 JNK1/JNK2 腺病毒感染性滴度检测用改进的病毒半数组织细胞感染量（5culture infective dose，TCID50）法。TCID50 法步骤如下：a 取细胞融合至 80%~90%的 293 细胞，吸去旧培养基，加入 PBS 溶液冲洗细胞消化细胞，按照每孔 1×105个细胞接种于两块 96 孔板中；b 对 JNK1/JNK2 重组腺病毒样品按梯度稀释，按下图在 96 孔板中加入稀释样
宁夏医科大学硕士学位论文 结果结果1 成功构建JNK1和JNK2基因过表达质粒并包装入腺病毒1.1构建质粒后，汉恒生物科技（上海）公司测序结果与目的序列完全匹配，验证JNK1/JNK2目的片段已克隆入载体中（图3、图4）
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