SFRP5通过Wnt信号通路抑制黑色素瘤细胞迁移与侵袭

发布时间：2020-09-22 21:15

　　目的:分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)在多种肿瘤的发生发展中起着重要作用。然而,SFRP5在黑色素瘤中的作用尚不清楚。本实验旨在探讨SFRP5对黑色素瘤细胞生物学特征的影响并阐明具体机制。方法:分别使用免疫组织化学和Western blot检测SFRP5在黑色素瘤组织和黑色素细胞中的表达量。在体外,利用MTT实验、集落形成实验检测SFRP5对黑色素瘤细胞增殖的影响;流式实验检测SFRP5对黑色素瘤细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Tanswell迁移实验检测SFRP5对黑色素瘤细胞迁移的影响;Tanswell侵袭实验检测SFRP5对黑色素瘤细胞侵袭的影响。机制方面,利用Western blot探讨SFRP5在黑色素瘤细胞中对Wnt信号通路的调控;Western blot和qRT-PCR检测SFRP5对上皮间叶转化(EMT)以及基质金属蛋白酶2/9(MMP2/9)的影响。在体内,将处理后的黑色素瘤细胞接种于裸鼠皮下,观察SFRP5对黑色素瘤生长的影响;免疫组化、Western blot和qRT-PCR检测SFRP5对血管生成的影响;HE染色观察SFRP5对黑色素瘤肺转移的作用;免疫组织化学检测瘤体内EMT和MMP2/9的表达情况。结果:我们发现SFRP5在黑色素瘤组织和黑色素瘤细胞中表达明显减少。在体外,过表达SFRP5对黑色素瘤细胞的增殖和凋亡没有影响,但明显抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭。机制方面,过表达SFRP5通过Wnt信号通路抑制EMT和减少MMP2/9表达,从而抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭。在裸鼠体内,过表达SFRP5通过减少血管生成抑制黑色素瘤生长以及减少肺转移。结论:SFRP5抑制黑色素瘤细胞迁移与侵袭,其机制可能与Wnt信号通路有关。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R739.5
【部分图文】：

黑色素瘤,正常皮肤,表达率,免疫组化

图 1.1 SFRP5 在黑色素瘤组织中表达下调Figure1.1 SFRP5 expression was downregulated in melanoma tissuesA: SFRP5 在黑色素瘤组织和正常皮肤组织中的免疫组化结果；B：SFRP5 阴性表达率和阳性表达率；C：GEPIA 数据库中 SFRP5 在正常皮肤组织和黑色素瘤组织中的表达量。A: Representative immunohistochemical staining of SFRP5 in normal skin and melanoma

黑色素细胞

图 1.2 SFRP5 在黑色素瘤细胞中表达下调 1.2 SFRP5 expression was downregulated in melanoma析 SFRP5 在人黑色素细胞和黑色素瘤细胞株中的表达sion in human epidermal melanocytes cell line and meln blot analysis. ***P＜0.001

过表达,细胞转染,细胞

结果显示过表达 SFRP5 对 A375 细胞和 GLL-19 细胞的凋亡没有影响（图2.1D）。图 2.1 过表达 SFRP5 对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响Figure 2.1 The effect of SFRP5 overexpression on proliferation and apoptosisA：Western blot 分析 A375 细胞和 GLL-19 细胞转染 AdSFRP5 后 SFRP5 的表达量；B：

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