拉坦前列素通过ERK通路调控人表皮黑素细胞的黑素合成功能

发布时间：2020-10-16 08:49

　　 目的探究拉坦前列素对人表皮黑素细胞增殖与黑素合成功能的影响,并对其作用机制进行初步探索。方法提取人原代表皮黑素细胞并培养,用不同浓度(10~(-5)、10~(-6)、10~(-7)mol/L)的拉坦前列素处理细胞48小时。采用CCK8法检测黑素细胞增殖水平;NaOH溶解法检测黑素合成水平;Masson-Fontana染色法观察细胞合成黑素颗粒数量及分布;多巴比色法检测酪氨酸酶活性;Western印迹法及荧光定量PCR分别检测黑素合成相关基因小眼畸形相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)蛋白及mRNA的表达;以及采用Western印迹法检测经拉坦前列素处理前后的人表皮黑素细胞表达MAPK途径相关蛋白的水平。结果(1)10~(-6)、10~-55 mol/L拉坦前列素组黑素细胞的增殖水平与对照组相比更高,黑素合成亦显著增加。10~(-7)mol/L拉坦前列素组较对照组的黑素细胞增殖水平、黑素合成差异均无统计学意义。Masson-Fontana法染色后显示,经拉坦前列素处理的黑素细胞树突上的黑素颗粒数量均较对照组更多,且黑素颗粒的颜色更深。(2)10~(-6)、10~-55 mol/L拉坦前列素组酪氨酸酶活性与对照组相比更高。一定浓度的拉坦前列素可增加MITF、TYR、TYRP1 mRNA的表达,其中MITF mRNA的表达随拉坦前列素浓度的升高而增加,而TYR和TYRP1的mRNA的表达均在10~-66 mol/L拉坦前列素组达峰。同样的,MITF、TYR、TYRP1蛋白的表达也受拉坦前列素的影响,其中,各浓度拉坦前列素均能促进MITF蛋白的表达,而TYR、TYRP1蛋白的表达亦在10~-66 mol/L拉坦前列素组升高最明显。(3)经拉坦前列素处理的人表皮黑素细胞上的p-ERK表达降低,而在给予拉坦前列素处理的基础上添加ERK激动剂干预后,细胞酪氨酸酶活性、黑素合成功能及MITF、TYR、TYRP1基因mRNA和蛋白的表达均较单予拉坦前列素处理时降低。结论拉坦前列素对人表皮黑素细胞的增殖水平、酪氨酸酶活性以及黑素合成功能有一定的促进作用,这种作用可能经由MAPK/ERK-MITF-TYR途径调控。
【学位单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R758.41
【部分图文】：

拉坦前列素通过 ERK 通路调控人表皮黑素细胞的黑素合成功能软件分析数据，GraphPad Prism 8.0 软件绘制统计图。2.3 实验结果2.3.1 人原代表皮黑素细胞的培养观察与鉴定原代培养后一周左右，可在倒置显微镜下观察到贴壁生长的黑素细胞，其形态一致，大小均一，具有典型树突样结构。黑素细胞胞核呈椭圆形，由核向外分支出 2 至 5 条树突，树突细长，具有折光性，高倍镜下可观察到黑素颗粒沿树突分布。对培养至第三代的黑素细胞进行多巴染色（DOPA 染色），观察到细胞胞浆及树突呈现棕黑色，证实细胞为具有酪氨酸酶活性的正常黑素细胞。

图 2.2 拉坦前列素对人表皮黑素细胞合成黑素的影响（Masson-Fontana 染色，×200）A：对照组；B：10-7mol/L 拉坦前列素组；C：10-6mol/L 拉坦前列素组；D：10-5mol/L 坦前列素组Figure 2.2 The effect of Latanoprost on the melanin content of human epidermal melanocyte(Masson-Fontana staining, ×200) A: Control group; B: 10-7mol/L Latanoprost group; C: 10-6mol/L Latanoprost group; D: 10-5mol/L Latanoprost group4 讨论人类皮肤及毛发的颜色主要由黑素细胞决定，除了血红蛋白和类胡萝卜素以，黑素细胞分泌的黑色素是色素沉着的主要原因。黑色素主要分为两种类型色/黄色的褐黑素和褐色/黑色的真黑素。含有黑色素的颗粒被称为黑素小体，们由黑素细胞分泌后转运至角质形成细胞，并在此呈现皮肤颜色。白癜风是一

mol/L 拉坦前列素组最高。图3.1 不同浓度拉坦前列素对人表皮黑素细胞小眼畸形相关转录因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）mRNA表达的影响
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本文编号：2843039