恶性黑色素瘤中MAPK信号通路及相关癌基因的研究

发布时间：2020-11-17 20:50

　　 背景研究表明在皮肤恶性黑色素瘤中癌基因NRAS的突变率为9-15%,BRAF的突变率为60-66%,而在视网膜恶性黑色素瘤中却没有发现NRAS和BRAF基因的突变。在鼻腔恶性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因的突变率未见报道。本部分实验旨在研究鼻腔恶性黑色素瘤标本中NRAS和BRAF的突变。 方法：提取12例鼻腔恶性黑色素瘤新鲜组织中的DNA,经PCR扩增后,进行基因序列分析并与正常NRAS和BRAF基因序列比较。 结果：12例标本中,未发现NRAS基因突变,8例标本中发现1例BRAF基因突变。 结论：鼻腔恶性黑色素瘤的NRAS和BRAF突变率远低于皮肤恶性黑色素瘤。 背景研究表明Ras-Raf-MAPKK-ERK信号通路的持续活化在皮肤恶性黑色素瘤的发生、发展中起着重要作用,而这一信号通路的持续活化与NRAS和BRAF基因的高突变率有关。在前面的研究中,我们在鼻腔恶性黑色素瘤中未发现NRAS基因突变,BRAF基因的突变率也很低,那么在鼻腔恶性黑色素瘤中是否存在ERK的持续活化呢?本部分实验旨在研究鼻腔恶性黑色素瘤中持续活化的ERK。 方法：用Western蛋白印迹法检测12例鼻腔恶性黑色素瘤标本中活化的ERK。 结果：12例鼻腔恶性黑色素瘤标本中,有8例表达活化的ERK,占66%。 结论：：ERK的持续活化是鼻腔恶性黑色素瘤的发病机制之 背景：研究表明ERK的持续活化在恶性黑色素瘤的发生、发展中起着重要作用,ERK的激活对于Ras诱导的许多细胞反应、许多转录因子(Elk1、cEts1、c-Ets2)的激活以及许多激酶(如p90rsk1、MNK1、MNK2)的激活是至关重要的。在恶性黑色素瘤中激活的ERK究竟参与了哪些细胞反应还有待进一步研究。本部分实验旨在研究ERK对细胞周期的影响及其机制。 方法：选用持续活化的ERK细胞株A-375,用MEK抑制剂PD98059阻断ERK信号通路,观察细胞生长曲线并用MTT法观察细胞增殖,用流式细胞仪检测细胞周期,用Western蛋白印迹法检测活化的ERK和细胞周期蛋白Cycline D1的表达。 结果：ERK信号通路阻断后,G0-1期细胞所占比例明显增加(p0.01),S期细胞所占比例明显降低(p0.01),同时细胞周期蛋白Cyclin Dl无表达。 结论：ERK信号通路阻断后,细胞阻滞于G0-1期。其机制与细胞周期蛋白Cyclin D1的合成抑制有关。 背景：研究表明ERK的持续活化在恶性黑色素瘤的发生、发展中起着重要作用,同时有研究表明ERK信号转导通路在急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia AML)中起着一定的抗凋亡作用。而ERK信号通路是否在恶性黑色素瘤细胞中也有抗凋亡作用尚无报道。本部分实验旨在探索活化的ERK信号通路在恶性黑色素瘤细胞中的抗凋亡作用。 方法：用恶性黑色素瘤细胞A-375分别在含血清、含血清加PD98059、无血清、无血清加PD98059培液中培养,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,并用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞,比较各组细胞间凋亡差异。 结果：ERK通路激活时,无血清组与含血清组细胞凋亡无显著性差异,ERK通路阻断后,含血清组与无血清组细胞凋亡有显著性差异。 结论：ERK信号转导通路在恶性黑色素瘤细胞中有一定的抗凋亡作用。
【学位单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R739.5
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
    参考文献
第一部分 鼻腔恶性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因突变研究
    材料与方法
    结果
    附图
    讨论
    参考文献
第二部分 鼻腔恶性黑色素瘤中持续活化的ERK酶检测
    材料与方法
    结果
    附图
    讨论
    参考文献
第三部分 ERK信号通路阻断后恶性黑色素瘤细胞周期的变化
    材料与方法
    结果
    附图
    讨论
    参考文献
第四部分 ERK信号通路在恶性黑色素瘤细胞中的抗凋亡作用
    材料与方法
    结果
    附图
    讨论
    参考文献
全文小结
综述
    参考文献
己发表文章
致谢

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 ;MAPK signal pathways in the regulation of cell proliferation in mammalian cells[J];Cell Research;2002年01期

本文编号：2887900