PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物对黑素瘤细胞的抑制作用

发布时间：2020-12-09 06:09

　　目的将树枝状聚合物聚酰胺-胺（PAMAM）包载可以表达具有抑制人恶性黑素瘤细胞A375增殖、侵袭和转移的miR-34a的质粒sh-miR-34a,构建聚阳离子纳米复合物PAMAM/sh-miR-34a。考察形成的复合物的粒径、zeta电位、细胞摄取,以及对A375细胞的抑制作用。方法利用粒度测定仪测定纳米复合物的粒径和电位,凝胶电泳实验测定PAMAM对sh-miR-34a的包裹能力;利用罗丹明标记的sh-miR-34a考察A375细胞对纳米复合物的摄取;CCK8法测定PAMAM/shmiR-34a对A375细胞的抑制作用;Transwell法测定PAMAM/sh-miR-34a抑制A375细胞迁移和侵袭作用;蛋白质印迹法测定PAMAM/sh-miR-34a对A375细胞中pAkt、pRb、pERK1/2蛋白表达的阻滞作用。结果 PAMAM包裹sh-miR-34a可形成稳定的纳米复合物,在N/P=20时,细胞对PAMAM/sh-miR-34a的摄取达最高（P<0.05）。PAMAM可以有效携带shmiR-34a进入A375细胞,体外抑制A375细胞的增殖、侵袭和迁移,并且可以阻滞A... 

【文章来源】：第二军医大学学报. 2016年02期 第191-196页 北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1主要仪器和试剂
    1.2 A375人黑素瘤细胞原代培养
    1.3 PAMAM/sh-miR-34a复合物的制备及粒径和zeta电位测定
    1.4复合物凝胶电泳阻滞分析
    1.5荧光显微镜观察A375细胞对PAMAM/sh-miR-34a复合物的摄取
    1.6流式细胞术检测A375细胞对PAMAM/sh-miR-34a复合物的摄取
    1.7 CCK8法检测PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物抗恶性黑素瘤细胞增殖效果
    1.8 PAMAM/sh-miR-34a复合物抑制A375细胞迁移和侵袭能力考察
    1.9蛋白质印迹法检测PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物对A375细胞中相关蛋白的抑制
    1.10统计学处理
2 结果
    2.1不同N/P值的PAMAM/sh-miR-34a复合物粒径和zeta电位考察
    2.2复合物凝胶电泳阻滞分析结果
    2.3定性观察和定量A375细胞对PAMAM/sh-miR-34a复合物的摄取
    2.4 PAMAM/sh-miR-34a复合物抗A375人黑素瘤细胞增殖效果
    2.5 PAMAM/sh-miR-34a复合物抑制A375细胞迁移
    2.6 PAMAM/sh-miR-34a复合物抑制A375细胞侵袭
    2.7 PAMAM/sh-miR-34a复合物对A375细胞中pAkt、pRb、pERK1/2蛋白抑制效果
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]U0126对黑素瘤细胞A375侵袭的抑制作用[J]. 陈办成,姚勇丰,杨媛慧,钟绮丽,邵勇,张杰,叶庭路,胡小平,于波.  中国麻风皮肤病杂志. 2013 (02)
[2]药物载体PAMAM树状大分子的毒理[J]. 沈楠,朱宏.  材料导报. 2012(19)
[3]人乳腺癌细胞凋亡与去磷酸化RB蛋白的关系[J]. 欧阳学农,王文武,姜浩.  中国癌症杂志. 2004(04)



本文编号：2906413