GnRH/M2融合蛋白致敏DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞移植瘤的抑制

发布时间：2020-12-11 07:49

　　目的:制备促性腺激素释放激素（gonadotropin releasing hormone,GnRH）与M2的融合蛋白（GnRH/M2）,研究由该融合蛋白致敏而成的DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法:构建表达载体p ET28a-ans B-CGnRH3-hinge-MVP-M2质粒,该质粒转化的工程菌在乳糖的诱导下,融合蛋白ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2以包涵体形式表达,经超声破碎、洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将蛋白多肽GnRH3-hinge-MVP-M2释放出来,并通过DEAE-52阴离子交换层析进行分离。将此融合多肽致敏DC获得DC疫苗。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤模型,按接种疫苗不同,分为:环磷酰胺组（CTX）、GnRH/M2融合蛋白致敏DC组（GDC）、肿瘤细胞裂解物致敏DC组（BDC）、GnRH/M2融合蛋白致敏DC+环磷酰胺组（GDCTX）、肿瘤细胞裂解物致敏DC+环磷酰胺组（BDCTX）和生理盐水组（NS）,观察GnRH/M2疫苗对模型小鼠的移植瘤生长、CTL杀伤能力和T细胞增殖的作用。结果:成功构建p E... 

【文章来源】：中国肿瘤生物治疗杂志. 2016年04期 第468-475页 北大核心

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料与试剂
    1.2 GnRH3-hinge-MVP-M2融合蛋白表达载体的构建
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP克隆载体的构建
        1.2.3 重组表达载体p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2的构建与鉴定
    1.3 融合蛋白的诱导表达、分离与纯化
    1.4 融合蛋白的生物活性测定
    1.5 DC疫苗的制备
    1.6 DC疫苗对小鼠B16F10黑色素瘤的免疫治疗
    1.7 LDH细胞毒性实验检测DC疫苗对模型小鼠CTL杀伤功能的影响
    1.8 混合淋巴反应（MLR）实验检测DC疫苗对模型小鼠T细胞增殖能力的影响
    1.9 统计学处理
2 结果
    2.1 成功构建并获得p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2表达载体
    2.2 M2基因片段正确插入p ET28a-ans B-C-Gn-RH3-hinge-MVP-M2表达载体
    2.3 诱导表达并分离、纯化融合蛋白ans B-C-Gn-RH3-hinge-MVP-M2
    2.4 融合蛋白GnRH/M2能够刺激脾细胞增殖
    2.5 成功制备不同抗原致敏的DC疫苗
    2.6 GnRH/M2组DC疫苗抑制移植瘤生长
    2.7 GnRH/M2组DC疫苗增强模型小鼠CTL的杀伤功能
    2.8 GnRH/M2组DC疫苗促进小鼠T细胞增殖
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]黑素瘤的免疫治疗进展[J]. 臧学峰,唐晓义,张斌,陈虎.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2013(03)
[2]小鼠骨髓树突状细胞的培养扩增及生物学特性分析[J]. 彭福华,钟秀风,胡学强,王敦进,朱灿胜,王玉鸽.  中国组织工程研究与临床康复. 2008(53)



本文编号：2910155