RNAi沉默WT1基因逆转恶性黑素瘤细胞耐药性的研究

发布时间：2020-12-13 03:09

　　目的:恶性黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,其对常规化疗药物的耐药性严重影响其预后,因而逆转肿瘤细胞的耐药性,以提高化疗疗效,是治疗恶性黑素瘤的重要课题。目前认为恶性黑素瘤耐药的主要机制是凋亡抑制,越来越多研究证实特异性下调某些凋亡抑制基因以促进肿瘤细胞凋亡,可以增加恶性黑素瘤对化疗药物的敏感性。WT1基因最早发现作为一种抑癌基因参与Wilm’s瘤的发生,近年来研究证实WT1基因在多种实体瘤细胞中高表达,具有抑制肿瘤细胞凋亡作用,发挥癌基因的作用。国外研究发现WT1基因在80%以上恶性黑素瘤中表达,而在良性色素痣和正常皮肤中未见表达,下调WT1基因可以抑制恶性黑素瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。但抑制WT1基因表达能否逆转恶性黑素瘤细胞的耐药性尚未见报道。RNA干扰技术是近年来发展起来的基因沉默新技术,能高效,特异地抑制目的基因的表达,因此很快成为研究基因功能的重要工具。本研究旨在探讨利用RNA干扰沉默WT1基因对人转移性恶性黑素瘤WM451细胞生长,凋亡及其对顺铂敏感性的影响,为恶性黑素瘤的基因治疗提供理论依据。方法:1.构建针对WT1基因的siRNA真核表达载体;2.利用脂质体将siRNA... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：33 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

荧光显微镜显示转染WT1siRNA质粒24h后成功转染细胞

2.倒置显微镜观察转染前后细胞形态的变化：转染前，细胞贴壁较好，呈扁平多角形，中间有圆形的核，核内有一至多个核仁，转染后24小时，细胞变圆，贴壁不佳，细胞突起消失（见图2）。A:正常 WM451细胞 B:转染 WT1siRNA质粒的 WM541细胞图2 倒置显微镜显示转染前后细胞形态的变化3． RT-PCR检测 RNA干扰对 WM451细胞 WT1基因 mRNA的影响：细胞转染48小时后，实验组与空白对照组比较：实验组WT1mRNA表达水平下降了67%，实验组与阴性对照组比较：实验组WT1mRNA表达水平下降了60%，空白对照组与阴性对照组之间未见显著差异（见图3）。

1 2 3 4检测RNA 干扰对WM451细胞WT1基因mRNA arker 2 空白对照 3 阴性对照 4 试验组ot检测 RNA干扰对 WM451细胞 WT1蛋白表组比较：WT1蛋白表达水平下降了67%。蛋白表达水平下降了63%,空白对照组与阴见图4）。1 2 3

【参考文献】：
期刊论文
[1]WT1基因与恶性肿瘤靶向免疫治疗[J]. 顾伟英,陈子兴.  肿瘤. 2007(03)
[2]RNA干扰的研究方法[J]. 杨宗照,帅江冰,Mudasser Habib.  中国兽药杂志. 2005(11)



本文编号：2913783