香烟烟雾提取物联合UVB照射对人皮肤成纤维细胞端粒长度和端粒酶活性的影响

发布时间：2017-04-16 05:28

  本文关键词：香烟烟雾提取物联合UVB照射对人皮肤成纤维细胞端粒长度和端粒酶活性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过观察香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)联合UVB照射对人皮肤成纤维细胞端粒长度和端粒酶活性的影响,进一步探讨在吸烟过程中产生的烟雾及紫外线照射在促使皮肤发生老化的作用。 方法：采用细胞旧液与细胞新液按1：2比例的方法培养人皮肤成纤维细胞并绘制生长曲线；MTT法检测CSE对人皮肤成纤维细胞增殖的影响；用三种不同浓度的CSE和UVB照射(30mJ/cm2)处理人皮肤成纤维细胞后采用实时定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测端粒长度的变化,同时采用聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)方法检测端粒酶活性的变化情况。 结果：采用细胞旧液与细胞新液按1：2比例的方法培养人皮肤成纤维细胞与常规培养方法相比较,其倍增时间相对较短,其潜伏期为0-1d,生长期为2-4d,第4d之后细胞增殖缓慢,进入一个比较稳定的平台期；常规培养细胞的方法：潜伏期为0-2d,生长增殖期为2-5d,第5d之后则进入稳定的平台期；CSE对人皮肤成纤维细胞的增殖在低浓度(37.5μL/mL)时具有促进作用,在高浓度(75μL/mL)时具有抑制作用,但与未加CSE组相比较,差异均无统计学意义(p0.05); UVB照射组和CSE联合UVB照射处理组人皮肤成纤维细胞的端粒长度与端粒酶活性的变化情况与未处理组差异具有统计学意义(p0.05),且随着CSE浓度的增加,端粒长度与端粒酶活性的变化情况越明显。 结论：采用按细胞旧液与细胞新液比例为1：2的方法培养人皮肤成纤维细胞其倍增时间相对较短,可在较短时间内获得增殖能力较强且生长稳定的细胞用于后续实验；通过MTT法检测得知,加入CSE处理组细胞增殖率与未加CSE组相比较,差异无统计学意义(p0.05); CSE和UVB照射可在缩短人皮肤成纤维细胞端粒长度的同时降低端粒酶的活性,且呈现浓度-效应关系。故我们推断CSE和UVB照射可通过影响端粒-端粒酶的变化来促进皮肤老化的发生。
【关键词】：香烟烟雾提取物 细胞旧液 皮肤成纤维细胞 UVB照射 端粒长度 端粒酶活性
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R751
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 缩略语/符号说明9-10
• 前言10-12
• 研究现状、成果10-11
• 研究目的、方法11-12
• 一、细胞旧液在人皮肤成纤维细胞培养中的应用12-23
• 1 材料与方法12-23
• 1.1 材料12-16
• 1.1.1 主要仪器12
• 1.1.2 主要试剂12-13
• 1.1.3 主要试剂的处理与配制13
• 1.1.3.1 胎牛血清的处理13
• 1.1.3.2 10%培养基的配置及常用液体的分装13
• 1.1.3.3 PBS缓冲液的配制13
• 1.1.4 方法13-16
• 1.1.4.1 细胞的复苏14
• 1.1.4.2 细胞的换液14
• 1.1.4.3 细胞的传代14-15
• 1.1.4.4 细胞的冻存15
• 1.1.4.5 人皮肤成纤维细胞生长曲线的绘制及形态学观察15
• 1.1.4.6 MTT检测细胞旧液对人皮肤成纤维细胞增殖的影响15-16
• 1.2 结果16-20
• 1.2.1 人皮肤成纤维细胞的形态学观察16-18
• 1.2.2 人皮肤成纤维细胞的生长曲线18-19
• 1.2.3 MTT检测细胞旧液对人皮肤成纤维细胞增殖的影响19-20
• 1.3 讨论20-22
• 1.4 小结22-23
• 二、香烟烟雾提取物联合UVB照射对人皮肤成纤维细胞端粒长度的影响23-36
• 2 材料与方法23-36
• 2.1 材料23-28
• 2.1.1 主要仪器23
• 2.1.2 主要试剂23-24
• 2.1.3 方法24-28
• 2.1.3.1 香烟烟雾提取物的制备24
• 2.1.3.2 实验步骤与实验分组24-25
• 2.1.3.3 MTT法检测香烟烟雾提取物对人皮肤成纤维细胞增殖的影响25-26
• 2.1.3.4 RT-PCR法检测端粒长度的变化情况26-28
• 2.2 结果28-33
• 2.2.1 香烟烟雾提取物对人皮肤成纤维细胞增殖的影响28-29
• 2.2.2 RT-PCR检测端粒长度的变化结果29-33
• 2.2.2.1 端粒长度与内参36B4的溶解曲线及扩增标准曲线29-32
• 2.2.2.2 RT-PCR相对定量结果32-33
• 2.3 讨论33-35
• 2.4 小结35-36
• 三、香烟烟雾提取物联合UVB照射对人皮肤成纤维细胞端粒酶活性的影响36-41
• 3 材料与方法36-41
• 3.1 材料36
• 3.1.1 主要仪器36
• 3.1.2 主要试剂36
• 3.2 方法36-37
• 3.3 结果37-39
• 3.4 讨论39-40
• 3.5 小结40-41
• 结论41-42
• 参考文献42-45
• 发表论文和参加科研情况说明45-46
• 综述46-54
• 吸烟、端粒与皮肤老化的研究进展46-51
• 综述参考文献51-54
• 致谢54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：310126