泛发性脓疱性银屑病IL36RN突变研究
发布时间：2021-04-06 23:47
目的:研究达斡尔族IL-36Ra缺陷病（DITRA）一家系中IL36RN的突变情况。方法:2例患者分别为48岁和51岁同胞兄弟,家族中无类似疾病患者。以168例健康汉族人作为对照组,采用聚合酶链反应（PCR）扩增2例患者及其4例健康家族成员IL36RN基因的全部外显子及其侧翼序列并测序。结果:例1系婴儿期发病,发病时皮疹泛发全身,病情重;例2系50岁发病,皮疹局限于躯干,病情较轻。2例患者均发生了IL36RN c.1 15+6T>C纯合突变,4例健康家族成员该位点发生了杂合突变,168例对照组中有7例该位点发生杂合突变。结论:IL36RN c.115+6T>C纯合突变可能是2例患者发生DITRA的原因。.
【文章来源】：临床皮肤科杂志. 2014,43(09)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
泛发性脓疱性银屑病患者（n,)皮损及皮损组织病理像(HE染色）
534 临床皮肤科杂志2014年43卷第9期JClinDermatol,September2014，Vol.43,No.9度，〉20ng/pL进行PCR扩增。体检中心随机抽取了168例无关健康汉族人外周血基因组DNA作为对照。 f：■1.2.2PCR扩增及测序IL36RN来源于GenBank网 漂■站(NM_012275),用引物设计软件PRIMER3对此基 25。■因全部5个外显子及外显子-内含子交界区设计扩增引物，共设计了7对引物（因外显子5过大含2291个 M:标准参照物;1~7:分别为第1~5.3号外显子PCR扩增产物碱基对故拆分为3部分分别设计引物）。引物由上海 图4IL36RN1-5.3号外显子PCR扩增产物生工生物工程公司合成,合成量均为20D(表1)。以提 2%琼脂糖凝胶电？永图取外周血基因组DNA为模板，反应体系总体积50|jlL,包括2xEasyTaqPCRSuperMix25|jlL,DNA4 aaag、ttggcgatpL,正向引物2|xL，反向引物2jjiL，ddH2017|xL0扩 ?增条件：94t预变性5min后,94t变性30s，60弋退火30s,72t延伸1min,共35个循环，72t延伸7min。2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，在紫外线灯 I ：：下观察结果，在预计分子量位置出现条带者确定为阳性结果。PCR扩增产物经凝胶电泳回收纯化后由上海 AAA(5JTTGGT/CGAT美吉生物公司完成DNA测序，对外显子5.1、5.2和 @ (5.3扩增产物进行双向测序,对所有发生IL36RN突变产物均进行欢向测序。 !\丨；I'\. 口州曰z 一油口丨糾十幻um■防乂电 - -iL li'''■v表1IL36RN1~5?外显子PCR扩增引物序列及片段长度 AAAG6TTGGTGAT 外显子 mi 产物大小(bp)1 上游引物(5’-3’）AGTGCTrCTGGCGACTTAGG276 ?下游引物(5’-3’）GGAGAGAGAGGCTGAGTTGG A.12 上游引物(5’-3’）CTGACCCCAGACCCAGAATC261 A M\：下游引物(5
3’）AGCTGGACAACGGGTCTATC II,\\II3 上游引物(5'-3')GTTACTTCTGGCACAGTAGG 392 I\j|....../{/\]\..下游引物(5’-3’）CACnTGCTGAGAGGTGTAG4 上游弓丨物(5’-3’）TCATGACAGCTGCTGAGAAG 386 A:患者II,和II2发生IL36RNc.115+6T>C纯合突变；B:4例家族下游引物(5’-3’）AGCTGCCATCAACAGAATCC正常成员12、II3、n5、IE,及7例无关正常人对照中发生IL36RNc.5.1上游引物(5’-3’）AGATGCTGAGCCTACTGAAG950 115+6T>C杂合突变；C:161例无关正常人对照中未检测到此突变下游引物(5’-3’）TCTGACATCAGCACCTCCTC 图5泛发性脓抱性银屑病患者及正常人5.2 上游引物(5’-3’）TAGAGTCAGGGATCTATGGC 940 IL36RN突变位点测序图下游引物(5’-3')GTGTCCTCTCCTTTTCATAC5.3 上游引物(5，-3，）CAAATTCACATCCTTCTTGG 917下游引物(5’-3’）GGGTAAATGAAGGATAGTTG 3MTt根据II,及II2两例临床表现为泛发性水肿性红“^ 斑基础上发生脓疱,伴发热、血沉快、C反应蛋白升高所有引物在基因组DNA中均扩增出预期长度的 等，其中一患者组织病理检查见Kogoj脓肿，2例患者片段(图4),产物纯化后测序，将患者及家族中正常人 均符合GPP诊断;同时检测发现IL36RNC.115+6T>C全部外显子直接测序结果与UCSC网站（http:// 纯合突变，故DITRA诊断成立。本家系符合常染色体genome.ucsc.edu/)所公布的序列进行比对。患者II,和 隐性遗传病规律（图1),进一步支持DITRA诊断。H2IL36RN第3内含子剪切位点发生1个纯合突变， Farooq等[5征实c.l15+6T>C杂合突变可造成IL-36RN即IL36RNC.115+6T>C(图5A)，反向测序亦证实此突 转录过程中外显子3被异常剪切，导致外显子2和外变。4例健康家族成员12、Ih、115和历，发生IL36RN 显子4直接拼接，从而发生移码突?
【参考文献】：
期刊论文
[1]白介素36与银屑病[J]. 舒丹,苏飞,晋红中. 中华皮肤科杂志. 2013 (07)
本文编号：3122381
【文章来源】：临床皮肤科杂志. 2014,43(09)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
泛发性脓疱性银屑病患者（n,)皮损及皮损组织病理像(HE染色）
534 临床皮肤科杂志2014年43卷第9期JClinDermatol,September2014，Vol.43,No.9度，〉20ng/pL进行PCR扩增。体检中心随机抽取了168例无关健康汉族人外周血基因组DNA作为对照。 f：■1.2.2PCR扩增及测序IL36RN来源于GenBank网 漂■站(NM_012275),用引物设计软件PRIMER3对此基 25。■因全部5个外显子及外显子-内含子交界区设计扩增引物，共设计了7对引物（因外显子5过大含2291个 M:标准参照物;1~7:分别为第1~5.3号外显子PCR扩增产物碱基对故拆分为3部分分别设计引物）。引物由上海 图4IL36RN1-5.3号外显子PCR扩增产物生工生物工程公司合成,合成量均为20D(表1)。以提 2%琼脂糖凝胶电？永图取外周血基因组DNA为模板，反应体系总体积50|jlL,包括2xEasyTaqPCRSuperMix25|jlL,DNA4 aaag、ttggcgatpL,正向引物2|xL，反向引物2jjiL，ddH2017|xL0扩 ?增条件：94t预变性5min后,94t变性30s，60弋退火30s,72t延伸1min,共35个循环，72t延伸7min。2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，在紫外线灯 I ：：下观察结果，在预计分子量位置出现条带者确定为阳性结果。PCR扩增产物经凝胶电泳回收纯化后由上海 AAA(5JTTGGT/CGAT美吉生物公司完成DNA测序，对外显子5.1、5.2和 @ (5.3扩增产物进行双向测序,对所有发生IL36RN突变产物均进行欢向测序。 !\丨；I'\. 口州曰z 一油口丨糾十幻um■防乂电 - -iL li'''■v表1IL36RN1~5?外显子PCR扩增引物序列及片段长度 AAAG6TTGGTGAT 外显子 mi 产物大小(bp)1 上游引物(5’-3’）AGTGCTrCTGGCGACTTAGG276 ?下游引物(5’-3’）GGAGAGAGAGGCTGAGTTGG A.12 上游引物(5’-3’）CTGACCCCAGACCCAGAATC261 A M\：下游引物(5
3’）AGCTGGACAACGGGTCTATC II,\\II3 上游引物(5'-3')GTTACTTCTGGCACAGTAGG 392 I\j|....../{/\]\..下游引物(5’-3’）CACnTGCTGAGAGGTGTAG4 上游弓丨物(5’-3’）TCATGACAGCTGCTGAGAAG 386 A:患者II,和II2发生IL36RNc.115+6T>C纯合突变；B:4例家族下游引物(5’-3’）AGCTGCCATCAACAGAATCC正常成员12、II3、n5、IE,及7例无关正常人对照中发生IL36RNc.5.1上游引物(5’-3’）AGATGCTGAGCCTACTGAAG950 115+6T>C杂合突变；C:161例无关正常人对照中未检测到此突变下游引物(5’-3’）TCTGACATCAGCACCTCCTC 图5泛发性脓抱性银屑病患者及正常人5.2 上游引物(5’-3’）TAGAGTCAGGGATCTATGGC 940 IL36RN突变位点测序图下游引物(5’-3')GTGTCCTCTCCTTTTCATAC5.3 上游引物(5，-3，）CAAATTCACATCCTTCTTGG 917下游引物(5’-3’）GGGTAAATGAAGGATAGTTG 3MTt根据II,及II2两例临床表现为泛发性水肿性红“^ 斑基础上发生脓疱,伴发热、血沉快、C反应蛋白升高所有引物在基因组DNA中均扩增出预期长度的 等，其中一患者组织病理检查见Kogoj脓肿，2例患者片段(图4),产物纯化后测序，将患者及家族中正常人 均符合GPP诊断;同时检测发现IL36RNC.115+6T>C全部外显子直接测序结果与UCSC网站（http:// 纯合突变，故DITRA诊断成立。本家系符合常染色体genome.ucsc.edu/)所公布的序列进行比对。患者II,和 隐性遗传病规律（图1),进一步支持DITRA诊断。H2IL36RN第3内含子剪切位点发生1个纯合突变， Farooq等[5征实c.l15+6T>C杂合突变可造成IL-36RN即IL36RNC.115+6T>C(图5A)，反向测序亦证实此突 转录过程中外显子3被异常剪切，导致外显子2和外变。4例健康家族成员12、Ih、115和历，发生IL36RN 显子4直接拼接，从而发生移码突?
【参考文献】：
期刊论文
[1]白介素36与银屑病[J]. 舒丹,苏飞,晋红中. 中华皮肤科杂志. 2013 (07)
本文编号：3122381
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