MiR-486-3p抑制角蛋白17表达在银屑病发病机制中的作用研究

发布时间：2017-04-17 16:38

  本文关键词：MiR-486-3p抑制角蛋白17表达在银屑病发病机制中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：银屑病是一种容易反复发作的慢性炎症性皮肤病，其发病机制尚不明确。目前认为它是一种由环境因素和遗传因素共同导致的以固有免疫和适应性免疫功能紊乱所致的疾病。其中Th1和Th17细胞及其分泌的多种细胞因子参与了疾病的发生。 银屑病的病理改变是由于角质形成细胞（KC）的增殖过快、分化受阻所致，而异常增殖的KC中角蛋白17（K17）表达高于正常KC。K17在正常的皮肤不表达或低表达，而在伤口愈合周围组织等部位高表达，并且我们前期的研究发现在银屑病存在“K17自身反应性T细胞细胞因子”的通路，此通路的恶性循环在银屑病皮损的发生与维持中发挥重要作用。除了多种细胞因子可调控K17的表达外，K17转录后调控机制尚不清楚。 MiRNA作为转录后调控的重要分子，参与了细胞的增殖、分化、迁移等各种生理活动，本研究通过生物信息学预测与文献回顾分析发现miR-486-3p可能参与了K17转录后抑制作用，并通过影响KC的增殖与迁移而参与银屑病的发病过程。 目的：探索K17转录后调控机制，对参与K17调控的miRNA分子在银屑病皮损中进行验证，并进一步研究其对KC功能的影响以及在银屑病发病过程中的作用。 方法：生物信息学预测与文献回顾筛选可能参与K17转录后调控的miRNA。利用RT-PCR的方法对筛选出的miRNA进行临床样本验证。用Western Blot方法检测银屑病皮损和正常皮肤中K17表达情况。对HaCaT细胞分别转染miR-486-3p的类似物（mimics）和无关片段（NC片段）后，用Western Blot检测K17蛋白表达，RT-PCR检测K17mRNA表达。构建含有K173UTR区种子序列、突变1为种子序列缺失片段、突变2为种子序列点突变的片段、突变3为种子序列重复的片段质粒，利用双荧光素酶报告系统检测miR-486-3p对K17表达抑制作用机制。通过对过表达K17的HaCaT细胞转染miR-486-3p的类似物后利用CCK8检测其增殖能力的变化，利用细胞划痕试验观察其迁移能力的变化。 结果：生物信息学预测结果显示miR-486-3p有8个碱基能够与K17的3UTR区的种子序列结合，并且在文献的基因芯片结果中也显示miR-486-3p在银屑病皮损中为正常皮肤的39%； RT-PCR检测10例银屑病患者的皮损和10例健康对照皮肤中miR-486-3p表达水平，银屑病皮损中miR-486-3p表达水平为0.211±0.120，低于健康对照的0.555±0.425，银屑病皮损为健康对照的0.380，（t=2.616，υ=9，，p0.05）；Western Blot结果显示转染mimics组较转染NC片段组K17表达水平明显降低；双荧光素酶报告系统检测结果含有K173UTR种子序列组与突变3组荧光强度分别为65.31±6.32和54.18±10.01，低于对照组，（p0.05），突变1组和突变2组荧光强度分别为114.77±16.14和110.21±12.99与对照组无明显差异（p0.05）；CCK8检测细胞增殖结果显示转染mimics组吸光度值为1.005±0.099，转染NC片段组为1.235±0.119，t=2.860，p0.05，转染mimics组较转染NC片段组细胞增殖速度明显减慢；细胞划痕实验观察结果显示过表达K17的HaCaT细胞转染mimics后较转染NC组迁移速度明显减慢。 结论：银屑病皮损中miR-486-3p表达较正常皮肤显著降低；miR-486-3p对K17表达具有负向调控作用，miR-486-3p对K17的负向调控作用是通过与其3UTR区的种子序列特异性结合发挥的；miR-486-3p抑制K17表达后能够显著抑制角质形成细胞的增殖和迁移。
【关键词】：银屑病 角蛋白17 miRNA miR-486-3p 增殖 迁移
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 缩略语表5-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 文献回顾15-26
• 1 材料26-32
• 1.1 主要仪器26-27
• 1.2 主要试剂27-29
• 1.3 主要试剂配制方法29-31
• 1.4 实验中所使用的细胞31
• 1.5 实验中所使用的质粒31-32
• 1.6 实验中所使用的 miR-486-3p 类似物和无关片段32
• 1.7 实验中所使用的菌种32
• 2 方法32-43
• 2.1 预测并筛选出参与 K17 转录后调控的 miRNA 并进行临床验证32-35
• 2.2 miR-486-3p 对 K17 表达的抑制作用及机制研究35-39
• 2.3 用双荧光素酶报告系统研究 miR-486-3p 抑制 K17 表达的机制39-42
• 2.4 miR-486-3p 抑制 K17 表达对 KC 功能的影响42-43
• 2.5 统计方法43
• 3 结果43-48
• 3.1 银屑病皮损与正常皮肤 miR-486-3p 表达差异检测43-44
• 3.2 miR-486-3p 对 K17 调控作用及机制44-45
• 3.3 双荧光素酶报告系统检测 miR-486-3p 对 K17 的抑制作用45-46
• 3.4 miR-486-3p 抑制 K17 表达后对 HaCaT 细胞功能的影响46-48
• 4 讨论48-52
• 小结52-53
• 参考文献53-61
• 附录61-63
• 个人简历和研究成果63-64
• 致谢64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 全国银屑病流行调查组;邵长庚;张国威;包寅德;蒋仲元;韩国柱;顾恒;;全国1984年银屑病流行调查报告[J];皮肤病与性病;1989年01期

2 丁晓岚;王婷琳;沈佚葳;王晓艳;周城;田珊;刘盈;彭光辉;周俊娥;薛树旗;王仁利;唐英;孟雪梅;裴广德;白云花;刘青;李航;张建中;;中国六省市银屑病流行病学调查[J];中国皮肤性病学杂志;2010年07期

  本文关键词：MiR-486-3p抑制角蛋白17表达在银屑病发病机制中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：313860